玛咖叶多糖的分离纯化、结构鉴定和生物活性研究

发布时间：2020-06-25 12:50

【摘要】：玛咖(Lepidium meyenii)是十字花科独行菜属一年生或两年生的一种草本植物,原产于南美秘鲁安第斯山脉地区。目前国内外关于玛咖的研究主要集中在玛咖根上,而对玛咖叶的关注较少。多糖是由多个单糖单位通过糖苷键聚合而成的生物活性大分子,具有多种生理活性。本文以产自云南的玛咖叶为原料,经提取、分离纯化后成功制备了多糖活性组分,并对其结构进行初步分析;同时对玛咖叶多糖的抗氧化活性以及免疫调节活性进行了研究。主要研究结果如下:1.玛咖叶粉末经索式提取后晾干以及95%乙醇浸泡处理后,热水浸提法提取玛咖叶多糖,脱蛋白处理后制备粗多糖(Crude lepidium meyenii leaves polysaccharides,CLMLP)。然后经DE-52纤维素离子交换层析柱初步分离纯化,得到DLMLP-1、DLMLP-2和DLMLP-3三种多糖纯化组分,选取总糖含量最高的组分DLMLP-3收集、浓缩、透析和冻干,然后经SephadexG-100葡聚糖凝胶柱进一步纯化后,制备多糖二级纯化组分LMLP。2.对LMLP的结构进行初步鉴定,SephadexG-100凝胶柱检测LMLP的平均分子量为58.43KDa,气相色谱仪检测LMLP的单糖组成半乳糖:阿拉伯糖:鼠李糖:葡萄糖:甘露糖的摩尔比为5.506:4.046:1.149:0.765:0.012。比色法鉴定LMLP中糖醛酸含量为27.43%,结合单糖组成分析结果,其半乳糖含量为47.95%,阿拉伯糖为35.25%,鼠李糖、葡萄糖和甘露糖的含量均较低。紫外全波长扫描后验证其中不含蛋白质和核酸。红外光谱结果显示LMLP中含有伸缩振动的O-H、C-H键、C=O键和α-糖苷键等多糖特征吸收峰。通过高碘酸氧化以及Smith降解后气相色谱分析其中的糖苷键类型,结果表明LMLP中存在1-6位键合的糖基或非还原末端糖基,1-2,1-4,1-2,6,或1-4,6,1-3键等糖苷键类型。3.LMLP体外DPPH清除能力和还原能力的测定。结果表明:当LMLP的浓度为1mg/mL时,其DPPH清除率为68.42%,LMLP的DPPH清除能力的半最大效应浓度(EC_(50))为3.72mg/mL。当LMLP浓度为1mg/mL时,700nm处的吸光度值为0.079。以巨噬细胞系为模型,体外验证了LMLP对RAW264.7细胞的免疫调控作用。结果表明:LMLP能够种剂量依赖的促进RAW264.7细胞增殖能力,相应提高其吞噬能力,促进NO和IL-10细胞因子的分泌,且能够增强细胞表面抗原CD80的表达。综上所述,LMLP具有体外抗氧化和免疫调节活性。本文研究结果表明玛咖叶多糖纯化组分LMLP可以应用于新型功能食品的开发和利用,也为玛咖的综合利用奠定了基础。
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R284;R285
【图文】：

2nce 数据库中出版文章数目 （A）以 Polysaccharide 为关以 Polysaccharide and Characterization 为关键词检索er of scientific publications from Web of Science database (ysaccharide (B) the result of polysaccharide and characteriz取、分离纯化和结构鉴定概述取法对多糖结构的影响不尽相同，选择合适的提性的稳定性有重要的意义。多糖提取的方法不型的提取技术包括酶辅助提取法、超声辅助提

其上样浓度为 10mg/mL，样品体积为 2mL，用 1mL/min，离心管收集洗脱液，每个离心管的含量为 8洗脱液，苯酚硫酸法检测样品多糖含量。以收集的管数光度为纵坐标绘制葡聚糖 SephadexG-100 色谱柱洗脱曲论标准曲线的绘制硫酸法测定玛咖叶多糖中总糖的含量。不同浓度的葡萄糖线性关系，其线性回归方程为 y=0.015x+0.05，R2=0.998光度值，x 值代表葡萄糖浓度，如下图 2.1 所示。可见在具有良好线性关系。

【参考文献】

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本文编号：2729157