乌头赤石脂丸方抗心肌细胞凋亡的机制研究

发布时间：2020-06-27 01:20

【摘要】：目的:急性心肌梗死是急危重症,近年来在我国发病率和病死率逐渐上升。现代医学对急性心肌梗死院前急救多采取溶栓疗法为院内急救争取时间,然而存在医护人员赶到之前患者未能及时服用特效药进行自救而死亡的情况,无法为院前急救和院内治疗争取有效时间,因而开发急性心肌梗死早期患者自行急救的特效药物迫在眉睫。本实验通过H_2O_2诱导心肌细胞凋亡,主要应用乌头赤石脂丸组含药血清予以干预,探讨乌头赤石脂丸方抑制心肌细胞凋亡的机制。方法:选用20只大鼠分为正常组、乌头赤石脂丸组、阳性对照组(参附汤)进行常规饲养和给药,观察大鼠状态,5天后提取含药血清。选用H9C2心肌细胞株进行分组培养和传代。应用细胞计数器将H9C2心肌细胞按5000~10000个/孔种入96孔板,24h后准备细胞活力检测。设置4组时间(1,2,4,8h)与4个H_2O_2浓度(分别为600,900,1200,1500μmol/L),通过酶标仪检测各组的光密度,并计算细胞活力,得出最佳造模时间(4h)与H_2O_2造模浓度(900μmol/L)。依照此浓度与时间,制备正常组、H_2O_2模型组、阳性对照组和乌头赤石脂丸组(造模同时给予含药血清),进行组细胞活力检测。免疫荧光技术检测H9C2心肌细胞中Bcl-2、BAX的表达情况。通过蛋白印迹法(Western Blot,WB)检测B淋巴细胞瘤-2蛋白(B-cell cymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2-Assaciated X蛋白(Bcl-2-Assaciated X protein,BAX)的表达水平,并进行分析。结果:1.CCK-8法测定不同浓度H_2O_2诱导损伤的H9C2心肌细胞活力,结果显示900μmol/L浓度、时间为4h时最为接近半数致死率,有统计学意义(p0.01)。与模型组相比,乌头赤石脂丸组H9C2心肌细胞活力显著升高,接近正常组,有统计学意义(p0.05)。2.免疫荧光技术检测显示,正常组Bcl-2在心肌细胞核周围胞质中呈强阳性表达,模型组仅少量阳性表达。阳性对照组有相对较高的阳性表达,而乌头赤石脂丸组可见大量的阳性表达,荧光强度高于模型组,提示乌头赤石脂丸方可以上调心肌细胞中Bcl-2的表达。正常组中BAX的表达不明显,在模型组中呈高表达,阳性对照组荧光表达相对较低,而乌头赤石脂丸组仅见少量荧光表达,荧光强度低于模型组,提示乌头赤石脂丸方可以下调心肌细胞中BAX的表达。3.Western Blot技术检测显示,与正常组、模型组、阳性对照组比较,乌头赤石脂丸组心肌细胞中Bcl-2蛋白表达显著高于模型组(p0.01),有统计学意义;显著高于阳性对照组(p0.01),有统计学意义;接近正常组(p0.01),有统计学意义。乌头赤石脂丸组心肌细胞中BAX蛋白表达低于模型组(p0.05),有统计学意义;高于正常组(p0.01),有统计学意义;与阳性对照组比,略低于阳性对照组,乌头赤石脂丸组无统计学意义。结论:乌头赤石脂丸方能够抗H_2O_2对H9C2心肌细胞的损伤,可以通过上调线粒体通路抗凋亡蛋白Bcl-2表达、下调促凋亡蛋白BAX的表达,抑制心肌细胞凋亡。
【学位授予单位】：长春中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5
【图文】：

肌细胞,急性心肌梗死早期,蛋白,心肌细胞凋亡

20丸组图 4 乌头赤石脂丸方对心肌细胞 Bax 表达的影响结急性心肌梗死早期，心肌细胞凋亡是重要标志，本实验选择线粒体相关蛋白 BAX 蛋白进行一抗孵育，以相应的山羊抗兔作为二抗，通过观察蛋白的表达情况乌头赤石脂丸方抗 H2O2对心肌细胞的损伤情况。结果证明，乌头赤石脂丸组 B高于模型组，BAX 表达低于模型组。接下来需要进一步探究 Bcl-2 与 BAX 蛋白，以及乌头赤石脂丸方对 Bcl-2/BAX 的影响。

蛋白表达,蛋白,条带,内参

.0 软件分析和比较各组间数据，全部数值目标蛋白条带灰度值/内参蛋白条带灰度.01 视作差异显著。与分析ern Blot 检测显示，与正常组、模型组、cl-2 蛋白表达显著高于模型组（p<0.01）），有统计学意义；接近正常组（p<0.01 BAX 蛋白表达低于模型组（p<0.05），义；高于正常组（p<0.01），有统计学意学意义。表明乌头赤石脂丸方可以上调护作用。结果见图 5、图 6、图 7。A B C D

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