探讨膝痛颗粒方治疗大鼠膝关节骨性关节炎的起效机制

发布时间：2020-06-27 02:10

【摘要】：目的:探讨膝痛颗粒方对KOA的治疗作用与SDF-1/CXCR4信号通路的相关性。方法:将60只7周龄的SD大鼠,适应性喂养一周后,按随机数字表法分为6组:空白组、模型组、硫酸氨基葡萄糖组、膝痛颗粒方(分低、中、高浓度)组。予空白组大鼠的右膝关节注射50ul生理盐水,向其他各组大鼠的右膝关节注射50ul浓度为40mg/ml碘乙酸钠溶液建立KOA模型,确认模型成功后,用不同药物干预28天后取材。对各组大鼠右膝关节组织切片HE染色后进行形态学观察,评估其炎症程度;通过双抗体夹心酶联免疫吸附试验法(ELISA法)检测血清中IL-1β、TNF-α、MMP-3、MMP-13蛋白表达情况;通过免疫组化法检测关节滑膜中趋化因子SDF-1蛋白及其关节软骨中受体CXCR4的表达情况。结果:1.肉眼下大体观察及HE染色读片发现:空白组大鼠的关节软骨表面光滑,滑膜细胞排列整齐,未见炎性细胞浸润;模型组可见明显的骨性关节炎的表现,肉眼下可见严重软骨破坏,负重区可见软骨下骨,显微镜下可见绒毛上皮细胞增生,伸入关节腔;立方上皮细胞和滑膜细胞增生,并伴随大量血管增生;视野中可见炎性细胞聚集,局部滑膜组织发生纤维化。其余各组均可见不同程度的软骨破坏、滑膜增生纤维样变及炎性细胞浸润,均较模型组大鼠轻。药物干预组中以膝痛颗粒方高浓度组大鼠的关节破坏程度最轻;2.ELISA法检测结果分析显示:与空白组相比较,模型组与药物干预的各组的四项指标均明显升高,P0.05;且药物干预组与模型组相比,四项指标均不同程度的低于模型组,P0.05;阳性药物硫酸氨基葡萄糖与不同浓度的膝痛颗粒方对比分析时发现,A组与L组在炎症因子和基质金属蛋白酶的水均平近似,P0.05,A组与M组对比分析发现,M组的炎症因子水平及基质金属蛋白酶的表达水平明显低于A组,除IL-1β意外,均见P小于0.05;H组则明显优于A组,P0.05;比较不同浓度的膝痛颗粒方组之间的炎症因子和基质金属蛋白酶的水平时发现,四项指标具有相同的趋势,即L组M组H组,M组与L组,P小于0.05,M组与H组比较分析无显著统计学差异。3.免疫组化法检测数据结果分析显示:与空白组相比较,模型组与药物干预的各组SDF-1和CXCR4的光密度值明显高,即阳性细胞率明显高于空白组,P0.05;且药物干预组与模型组相比,阳性细胞率明显要低,P0.05;阳性药物硫酸氨基葡萄糖与不同浓度的膝痛颗粒方对比分析时发现,前者的滑膜细胞表达SDF-1的阳性率及软骨细胞表达CXCR4的阳性率明显要高后者,P0.05;比较不同浓度的膝痛颗粒方组之间的SDF-1蛋白及其受体的细胞阳性率时发现,基质细胞衍生因子-1与其受体的表达有相同的趋势,即L组M组H组,H组与L组相比,P0.05。结论:膝痛颗粒方能降低OA关节中炎症因子IL-1β、TNF-α的含量,减轻炎症的级联放大反应,抑制滑膜细胞产生趋化因子SDF-1的表达,从而抑制SDF-1/CXCR4信号通路,下调MMP-3、MMP-13的表达,抑制分解代谢,从而起到治疗膝关节骨性关节炎的作用。经过组间数据比较,发现膝痛颗粒方的对于改善KOA相关指标的效果优于硫酸氨基葡萄糖胶囊。
【学位授予单位】：北京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5
【图文】：

使用显微镜（ＤＭ３０００）观察各组大鼠膝关节ＨＥ染色病理片可见：逡逑空白组：关节腔完整，关节软骨面光滑，滑膜细胞排列整齐，未见炎性细胞。逡逑模型组：滑膜组织可见绒毛上皮细胞增生，伸入关节腔；立方上皮细胞和滑膜细生，并伴随大量血管增生；视野中可见炎性细胞聚集，局部滑膜组织发生纤维化，缺损，负重区域明显；逡逑硫酸氨基葡萄糖组：滑膜细胞增生，排列趋于规整，可见大量血管增生，软骨面；逡逑膝痛颗粒方低剂量：滑膜细胞增生，排列紊乱，可见纤维化，局部血管增生；软粗糙；逡逑膝痛颗粒方中剂量：滑膜细胞增生，仍可见大量血管增生，关节腔完整，软骨面滑；逡逑膝痛颗粒方高剂量：滑膜细胞排列整齐，有少量增生。关节软骨基本平滑。逡逑

图２各组炎症因子表达情况逡逑注：＃：与空白组比较ｐ＜０．邋０５，邋＃＃：邋ｐ＜０．邋０１；邋＊：与模型组比较ｐ＜０．邋０５，林：ｐ＜０．邋０１逡逑ＭＭＰ－３／ＭＭＰ－１３逡逑１５－逡逑ｉｉｍ逡逑４￥）逡逑ｇ邋１0＿逦＃＃逦Ｅｉｕ逦ＭＭ邋Ｐ－３逡逑Ｖ逦ｍ逦ｌｉ逦Ｂ逦ＭＭＰ－１３逡逑｜逦自逦＝－逡逑＾逦Ｓ邋ｍ逦甜逦＝＿Ｔ＿＃＃邋＾邋＊＊逡逑？５逦Ｓ邋＊＊逦＊＊逦＝白邋＊＊邋＊４邋白逡逑．ｓ逦＊＊邋＂ｉ├煎义希辏欤

本文编号：2731196