地龙提取物蚓激酶对UUO模型大鼠肾间质纤维化的影响

发布时间：2020-07-02 07:46

【摘要】：目的:本文采用血液生化检测、病理形态学检测、免疫组化以及计算机图像半定量分析等技术,观察传统中药地龙提取物—蚓激酶对肾间质纤维化大鼠的肾脏保护作用,并探讨其作用机制,为中医药防治肾脏纤维化提供科学依据,以更好地发挥临床指导作用。方法:第一部分将50只健康的清洁级SD大鼠随机分为五组:假手术组、UUO模型组、蚓激酶低剂量组、蚓激酶中剂量组、蚓激酶高剂量组,每组10只,普通健康饮食适应性饲养一周,采用单侧输尿管结扎(UUO)模型,造模后连续观察14天,使其自然形成肾间质纤维化模型。第二部分从造模后第2天开始对治疗组采用灌胃法进行药物干预,给药剂量按人与大鼠间每公斤体重占体表面积比值算得,蚓激酶低剂量组给予蚓激酶9万U·kg~(-1),蚓激酶中剂量组给予18万U·kg~(-1),蚓激酶高剂量组给予36万U·kg~(-1),给药体积为10 ml·kg~(-1);假手术组和UUO模型组每天给予等量生理盐水,造模后第2天开始给药,每天灌胃一次,连续14天。第三部分于术后第14天行腹腔麻醉,迅速采取腹主动脉血、摘取结扎侧肾脏放入福尔马林并制备为蜡块。检测血清中尿素氮(BUN)、肌酐(Scr),采用HE染色及Masson染色观察肾脏组织病理形态学损伤变化,用免疫组织化学法检测肾脏组织切片中TGF-β1、α-SMA、PAI-1、Col-Ⅰ以及Nox4蛋白的表达情况,并进行半定量分析。第四部分各组大鼠的实验数据使用SPSS 17.0统计软件进行分析处理,计量资料首先采用单因素方差分析,各组间差异存在统计学意义且样本符合正态分布,再进行独立样本t检验,结果以均数±标准差(?x±s)表示,以p0.05为差异有统计学意义。根据分析结果探讨蚓激酶对于肾间质纤维化的保护作用及可能机制。结果:1.生化指标检测结果:与假手术组相比较,UUO模型组大鼠尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)略有不同程度升高,但无统计学差异(p0.05);与UUO模型组相比较,蚓激酶给药各组Scr和BUN指标无明显差异(p0.05)。2.组织病理学:假手术组肾脏无肉眼可见变化。UUO模型组、蚓激酶各组梗阻侧肾脏体积有着不同程度增大,可见肾积水,肾实质变薄或有囊性感,肾脏包膜显著增厚,结扎处以上输尿管粗大,内有黄褐色的混浊尿液,提示单侧输尿管梗阻模型建立成功。HE染色可见假手术组肾脏组织结构正常,未见肾小管及集合管扩张及萎缩、间质纤维组织增生及炎细胞浸润;UUO模型组肾盂扩张,肾实质变薄,残存少部分正常肾脏组织,部分肾小球萎缩,大部分肾小管和集合管萎缩甚至消失,间质纤维组织显著增生出现纤维化,较多淋巴、浆细胞、中性粒细胞浸润,可见脓肿形成,局部肾盂尿路上皮增生;与模型组相比,蚓激酶给药各组肾小管萎缩程度及炎症细胞浸润程度较模型组降低,肾小管和集合管轻度萎缩,间质纤维组织纤维化程度呈剂量依赖性减轻。Masson染色显示假手术组染色主要位于肾小球基膜,Bowman囊、系膜区和肾小管基底膜,肾小管周围间质则未见蓝色胶原纤维沉积;UUO模型组Masson染色可见较多肾小球、肾小管、集合管存在,间距增宽,间质有较多胶原纤维增生,蓝色胶原纤维染色,胶原纤维较粗大;蚓激酶给药各组胶原纤维与模型组相比蓝色染色面积呈剂量依赖性减少。3.免疫组织化学结果:假手术组无明显病理变化,UUO模型组视野中可见大量阳性反应点,TGF-β1、α-SMA、Col-Ⅰ、PAI-1及Nox4的阳性表达均明显升高(p0.05)。与UUO模型组比较,蚓激酶各剂量组的阳性表达均呈剂量依赖性降低(p0.05)。结论:实验结果表明:蚓激酶对单侧输尿管梗阻大鼠的肾间质纤维化具有良好的保护作用,其机制可能是通过抑制促纤维化因子TGF-β1、α-SMA、PAI-1及Nox4的表达以及Col-Ⅰ胶原的合成来延缓肾脏纤维化的进程。
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5
【图文】：

肾小管间质损伤,情况

图 1 肾小管间质损伤情况看出，UUO 模型组与假手术组相比 Masson 染色与 UUO 模型组相比，均有不同程度的降低，其。结果（如图 3 所示），假手术组（图 3-1）Massowman 囊、系膜区和肾小管基底膜，肾小管周围UUO 模型组（图 3-2）Masson 染色可见较少肾距增宽，间质较多胶原纤维增生，蓝色胶原纤酶给药各组（图 3-3/4/5）胶原纤维与模型组相少。的选择化是慢性肾脏病发展至终末期肾脏病的共同途病发展至后期只能靠透析维持或者行肾移植术

蚓激酶,低剂量

图 2-1 假手术组 HE×100 图 2-2 UUO 模型组 HE×100图 2-3 蚓激酶低剂量组 HE×100 图 2-4 蚓激酶中剂量组 HE×100

【参考文献】