温补肾阳法对抑郁模型大鼠海马AC-cAMP-PKA信号通路及脑组织病理形态的影响

发布时间：2020-07-03 02:16

【摘要】：目的观察温补肾阳法对CUMS抑郁模型大鼠AC-cAMP-PKA信号通路的影响,和通过对大鼠大脑组织的光镜下观察,确定大鼠抑郁模型的病理变化及治疗效果,探索其作用机理,为临床使用提供依据。方法选用体重(200±20g)和Open-Field法评分相近的雄性SD大鼠84只,分为两部分,各部分随机分为4组,即空白组,抑郁症模型组,温补肾阳方组、盐酸氟西汀组。采用目前国际最为公认的CUMS法建立大鼠抑郁症模型,共安排21天,每2种刺激不能连续出现。7种不同刺激交替出现2l天后,用Open-Field实验进行评估,判断造模是否成功。采取灌胃给药方式。从实验22天开始,温补肾阳方组、盐酸氟西汀组分别灌胃给予相应药物。空白组、抑郁症模型对照组灌以等量生理盐水。每日1次,连续21天。第一部分共60只大鼠取海马组织,酶联免疫吸附法(Elisa)测定AC、cAMP含量,用蛋白质印迹法(Western Blot)检测海马组织PKAc蛋白水平。第二部分共24只大鼠取脑组织,经脱水、修剪、包埋、切片、HE染色、封片等程序,最后镜检,分标本照相并硬盘记录数据。结果1.Open-Field实验结果:第一部分针对58只大鼠的Open-Field实验结果显示除空白组外,其余各组大鼠经过21天慢性轻度不可预见性应激(CUMS)刺激后,均表现出不同程度抑郁样改变。Open-Field实验中各模型组造模后水平得分、垂直得分显著降低(P0.01),提示CUMS刺激引起大鼠运动能力和探索能力下降,造模成功。各组大鼠经过21天的灌胃处理后,温补肾阳方组、盐酸氟西汀组大鼠的抑郁行为得到显著改善,Open-Field实验中温补肾阳方组及盐酸氟西汀组大鼠水平得分、垂直得分显著提高,与抑郁模型组相比,具有显著差异(P0.01)。温补肾阳方组与盐酸氟西汀组相比,两者行为学指标差异无统计学意义(P0.05)。表明温补肾阳方能显著改善大鼠的抑郁行为,且其抗抑郁的功效与盐酸氟西汀接近。第二部分24只大鼠的Open-Field实验结果显示造模结束后(第21天、第42天),模型组、温补肾阳方组、盐酸氯西汀组与空白组相比,水平活动得分和垂直活动得分均明显降低,差别具有显著的统计学意义(P0.01)。第21天,各治疗组与模型组比较无统计学差异,第42天,温补肾阳方组与模型组比较,水平活动得分和垂直活动得分均明显上升,差别具有统计学意义(P0.05),盐酸氟西汀组与模型组比较,水平活动得分明显上升,差别具有统计学意义(P0.05),垂直活动得分差异无统计学意义,各治疗组间比较无统计学意义。给药结束后(第42天)与造模结束后(第21天)比较,空白组、模型组无统计学差异,温补肾阳方组、盐酸氟西汀组水平活动得分及垂直活动得分均有显著的统计学差异(P0.01)。说明温补肾阳方能有效改善大鼠的抑郁行为,其疗效与盐酸氟西汀组无明显差异。2.Elisa法检测大鼠海马AC、cAMP的结果:与空白组比较,模型大鼠海马中AC含量明显降低(P0.01);与模型组比较,盐酸氟西汀组、温补肾阳方组大鼠海马中AC含量明显增加(P0.05,P0.05)。与空白组比较,模型大鼠海马中cAMP含量明显降低(P0.01);与模型组比较,盐酸氟西汀组、温补肾阳方组大鼠海马中cAMP含量明显增加(P0.05,P0.05)。提示抑郁症模型的大鼠海马AC、cAMP含量显著降低,温阳中药和盐酸氟西汀治疗均可增加大鼠海马AC、cAMP含量,基本达到空白组水平。3.Western Blot法检测大鼠海马PKAc的结果:与空白组比较,模型大鼠海马中PKAc含量明显降低(P0.01);与模型组比较,盐酸氟西汀组、温补肾阳方组大鼠海马中PKAc含量明显增加(P0.01,P0.01),提示温补肾阳方和盐酸氟西汀均可提高抑郁模型大鼠海马中PKAc。两治疗组间比较,差异有明显统计学意义(P0.01)。4.大鼠抑郁模型脑组织病理检查结果:与空白组比较,模型组出现皮质表层水肿,锥体细胞轻中度水肿,脑组织轻中度炎细胞浸润。与模型组比较,温补肾阳方组脑灰质、白质区组织结构正常,灰质区细胞层次清楚,锥体及颗粒细胞排列整齐,细胞大小、数目、形态、分布均正常,细胞核、浆结构清晰,着色均匀,胞浆呈淡红色,细胞突起可见,胞核呈蓝色且较清亮,锥体细胞轻度水肿,脑组织可见轻度炎细胞浸润。盐酸氟西汀组脑灰质、白质区组织结构正常,灰质区细胞层次清楚,锥体及颗粒细胞排列整齐,细胞大小、数目、形态、分布均正常,细胞核、浆结构清晰,着色均匀,胞浆呈淡红色,细胞突起可见,胞核呈蓝色且较清亮,有少量标本可见锥体细胞轻度水肿,脑组织轻度炎细胞浸润。结论温补肾阳法的抗抑郁作用明确,能明显提高CUMS抑郁模型大鼠Open-Field实验评分,可显著改善抑郁实验动物的行为学异常,增加海马内AC、cAMP含量,提高海马内PKAc表达,AC-cAMP-PKA信号通路得到了上调,并且能改善皮质表层水肿,锥体细胞水肿,脑组织炎细胞浸润情况,起到抗抑郁作用,改善大鼠抑郁状态。
【学位授予单位】：成都中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5;R-332
【图文】：

24以标准物的浓度为纵坐标，OD值为横坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，各检测物标准曲线见图1，2，3，4。图1 大鼠AC标准曲线图图2 大鼠cAMP标准曲线图根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度，用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的线性回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。3.6.4 Western Blot 测定大鼠海马 PKAC 蛋白表达

测物标准曲线见图1，2，3，4。图1 大鼠AC标准曲线图图2 大鼠cAMP标准曲线图根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度，用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的线性回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。3.6.4 Western Blot 测定大鼠海马 PKAC 蛋白表达

【引证文献】

相关硕士学位论文 前2条

1 杨林;基于国医大师郭子光“人—症—病—证”体系对抑郁症中医生活质量量表的研究与优化[D];成都中医药大学;2018年

2 赵恒宇;基于国医大师郭子光“人-症-病-证”体系对抑郁症中医证候要素辨病辨证量表的研究及优化[D];成都中医药大学;2018年

本文编号：2739029