鸡胚肽及其锌螯合物的制备与应用研究

发布时间：2020-07-03 19:47

【摘要】：目的:本研究以鸡胚蛋为原料,通过酶解制备鸡胚肽并考察其抗氧化活性;制备鸡胚肽与微量元素锌的螯合物并考察其抗疲劳及提高免疫力的功能。方法:通过单因素试验法和正交试验法优选鸡胚蛋最佳酶解工艺。使用活性炭对酶解工艺制备出的鸡胚肽进行脱腥脱色处理并采用超滤对其进行分段。通过对鸡胚肽与微量元素锌螯合工艺的单因素试验法以及正交试验法得出最佳的螯合工艺。最后通过初步的抗疲劳及免疫调节药效学试验验证制得的富锌鸡胚肽的作用。结果:鸡胚蛋的最优酶解方法为先用碱性蛋白酶再用胰蛋白酶,最佳酶解工艺:底物浓度为10%,调节温度至55℃,pH值为8.0,加入3.0%的碱性蛋白酶酶解3h,待温度下降至40℃,加入2.0%胰蛋白酶酶解2h,此酶解工艺的水解度为31.96%。最佳的脱腥脱色工艺为在底物浓度为10%的情况下,加入0.5%的粉末活性炭,调节pH为5.0,于65℃水浴中加热搅拌40min,其脱色率为88.57%,肽回收率为82.63%,腥味小。鸡胚肽分段及抗氧化活性测定结果为分子量1KDa的鸡胚小肽抗氧化活性最好,IC_(50)为0.25mg/ml。富锌鸡胚肽中锌的螯合工艺最佳方法如下:螯合温度选定在70℃,锌离子与鸡胚肽的浓度之比为1:2,pH为8.0,螯合的时间为2h,在此反应条件下,螯合率为52.63%,采用火焰原子吸收光谱法测出锌在此螯合物的含量约为0.0937%。经过初步药效学研究可知富锌鸡胚肽具有较好的抗疲劳、提高免疫力的作用。结论:通过双酶酶解制备出的鸡胚肽具有较好的抗氧化活性;鸡胚肽经过与锌螯合之后制得的富锌鸡胚肽具有较好的抗疲劳和提高免疫的能力。
【学位授予单位】：山东中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R283;R285.5
【图文】：

蛋白酶,种类,酶解,底物浓度

表 2-3 鸡胚蛋中蛋白质含量测定试验结果样品蛋白质含量（%）平均值（%）水分含量（%）平均值（%）1 14.5 72.32 14.8 14.6 73.1 73.33 14.6 74.6 底物浓度的选择结果依据前期原材料的处理以及匀浆的预试验可知，当鸡胚底物浓度高于 20%，物浓稠，容易酶解不彻底，不适合酶解的进行；当底物浓度过低时 5%，物料特与底物碰撞、接触少，若要充分酶解所需时间比较长，酶解效果不理想，故浓度为 10%时，酶解效果比较好，所以综合考虑最佳的底物浓度为 10%。蛋白酶种类的选择结果。

酶解时间,水解度,适宜时间,酶解反应

图 2-2 不同酶解时间对水解度的影响图 2-2 数据可以得知，随着反应时间的延长，水解度不断增大。但再继续间，水解度的变化不大；可能原因是酶的专一性较强，在酶解反应的初始阶物的浓度都比较大，酶与底物能够充分接触从而使酶解反应迅速，随着反物逐渐被消耗，酶的特异性催化位点逐渐减少，考虑到生产的需要和经定胰蛋白酶酶解适宜时间为 2h、碱性蛋白酶酶解适宜时间为 3h。2）酶底比对水解度的影响

【参考文献】