红花化学成分的提取分离及其在大鼠体内分布的研究

发布时间：2020-07-03 21:19

【摘要】：红花(Carthamus tinctorius L)为菊科植物,其花作为传统药物在蒙药中具有重要应用。大多数研究集中于对红花化学成分的提取分离,本文在提取分离的基础上,对红花经口服给药后其多种化学成分在大鼠体内的分布进行了探究,主要内容如下:1.提取分离:采用乙醇超声的方法提取红花,粗提物经柱层析色谱(ODS、Sephadex LH20等)及半制备高效液相色谱进行分离纯化,经分析UPLC-MS和NMR数据鉴定出8个化合物的结构:羟基红花黄色素A、异槲皮素、绿原酸、山柰酚3-O-芸香糖苷、6-羟基山柰酚-3,6,7-三葡萄糖苷、Saffloquinoside E、Safflospermidine B、6-羟基山柰酚-3-芦丁糖苷-6-葡萄糖苷。2.分布研究:将提取分离得到的化合物建立UPLC-MS检测方法,并优化其在大鼠组织内的定性定量方法。采用单独给药及与诃子复合给药两种方式,分别于0.25 h、0.5 h、1 h、2 h、4 h五个时间点检测心、肝、脾、肺、肾及脑这六个组织中红花成分的含量,重点分析了红花的主要成分羟基红花黄色素A及6-羟基山柰酚-3-芦丁糖苷-6-葡萄糖苷。大鼠灌胃红花粉末后,这两个成分在各组织中分布广泛,且诃子有助于羟基红花黄色素A在较短时间内进入心脏和肝脏,并在心、肝、脾、肺及肾中可保持较为稳定持久的浓度。3.细胞毒性试验:红花及诃子粗提物对人正常肝细胞及肾表皮细胞进行细胞毒性评估,结果表明,红花粗提物在200μg/ml及以下浓度对两细胞无毒性,诃子粗提物在最高浓度(200μg/ml)下有轻微毒性。
【学位授予单位】：内蒙古大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R284.2;R285.5
【图文】：

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内蒙古大学硕士学位论文确定好最佳的乙醇提取条件后，我们取干燥的红花 5 kg，根据前期研究[97]碾榨后的红花提取率高的特点，用 80 %乙醇进行超声提取三次，提取时间为 2 h、1 h、30 min。将提取液减压浓缩，得到浸膏 1192g，将浸膏经大孔树脂，依次用水，30 %乙醇，60 %乙醇，90 %乙醇进行洗脱。浓缩后得到 Fr1-Fr4 四个部分。Fr1 部分通过过 ODS C18 柱，以 10%甲醇洗脱，得到 Fr5，过 ODS 柱用水洗脱得到化合物 1(53 mg)。Fr2 过 ODS 柱分别以 10%，20%甲醇洗脱，得到 Fr6 和 Fr7。Fr6 一部分通过制备液相得到化合物 2（9.8 mg），另一部分通过 ODS C18、Sephadex LH20 柱层析，得到化合物 3（115.5 mg）、化合物 4（12.3mg）和化合物 5（10.7 mg）。Fr7 通过 MCI、ODS C18 得到化合物 6（15 mg）和化合物7（23 mg）。Fr3 通过 ODS C18 用水洗脱，再通过 Sephadex LH20 60%甲醇洗脱、ODS C1850%甲醇洗脱得到化合物 8 (67 mg)。具体提取分离流程图见图 2-1

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内蒙古大学硕士学位论文化合物 8. 白色粉末 ESI-MS: 583(M-H)-:；C34H38N3O6；1H NMR（500 MHz，DMSO-d6）1.32/1.46 (2H, m, H8)；1.36/1.54 (2H, m, H-7)；1.63/1.79 (2H, m, H-3)；3.06/3.20 (2H, m,H-9), 3.13/3.30 (2H, m, H-2), 3.27/3.30 (2H, m, H-6), 3.35/3.39 (2H, m, H-4), 5.86/5.88 (J =12.5 Hz) (H-8'')；5.72/5.78 ( J = 12.5 Hz) (H-8'''), 6.30/6.36 (J = 15.5 Hz) (H-8' ), 6.47/ 6.50 ( J= 12.5 Hz) (H-7'')；6.53/6.56 ( J = 12.5 Hz) (H-7''')；6.67 (J = 8 Hz) (3''' ，5''')；6.67 ( J = 8 Hz)(3'''，5''')；6.74 ( J = 8 Hz) (H-3' , 5' )；7.16 (J = 8 Hz) (H-2'', 6'')；7.31 ( J = 8 Hz) (H-2''', 6''')；7.34 ( J = 8 Hz) (H-2' , 6' )； 7.37/7.39 (J = 15.5 Hz) (H-7' )；通过与文献数据对比基本一致，故确定该化合物 Safflospermidine B[33]。

【参考文献】