金不换（网果酸模）药材及科研制剂的基础研究

发布时间：2020-07-04 06:12

【摘要】：金不换为蓼科酸模属网果酸模Rumex chalepensis Mill.的根及根茎,味苦、性寒,具有清热解毒、破瘀生新、消肿痛、止血、通便、杀虫等功效,民间用于止血和治疗痢疾。现代临床应用认为其具有理气活血、破瘀生新、消肿生肌之功效。其单味药或复方治疗幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)相关性胃炎、消化性溃疡、十二指肠球部溃疡等均取得了较好的疗效。上世纪80年代,湖北省荆州市中医医院已制成金不换(网果酸模)冲剂,该制剂临床治感染Hp相关性胃炎等,疗效确切。但金不换(网果酸模)基础研究比较薄弱,没有建立地方和国家标准,质量难以控制,制剂未经过严格的工艺筛选,难以发挥最大药效,毒性及药效学研究几乎为空白。因此,有必要对已有30余年临床应用的金不换(网果酸模)开展全面的基础研究。本课题对金不换(网果酸模)的基原、化学成分、质量标准、制剂工艺、急性毒性、抑制胃酸、胃蛋白酶药理作用进行研究,主要内容及结果如下:1金不换基原鉴定金不换鉴定用样品采自湖北省荆州市公安县章庄铺镇,共2批,第一批具有根、茎、叶和花;第二批具有根、茎、叶和果实。黑龙江中医药大学王振月教授以植物形态和解剖上相似性为基础,依据《中国植物志》第25(1)卷,鉴定其为蓼科酸模属网果酸模Rumex chalepensis Mill.的干燥根及根茎。2金不换(网果酸模)化学成分分析采用UPLC-Q-TOF-MS技术,对金不换(网果酸模)可能含有的化学成分进行分析。结果共鉴定化合物18个,其中结合蒽醌化合物3个,游离蒽醌化合物3个,萘醌类化合物4个,黄酮类化合物7个,木脂素类1个。该研究结果为其质量控制及药效的阐明奠定了基础。3金不换(网果酸模)质量标准的制定3.1建立金不换(网果酸模)的薄层鉴别方法对金不换(网果酸模)中5个成分进行薄层鉴别。以硅胶G板为固定相,以乙酸乙酯-三氯甲烷-丙酮-甲醇-水(1:5:2.5:1.5:0.4)为展开剂,在紫外光365 nm下,检识大黄酚-8-O-β-D-葡萄糖苷;以硅胶G板为固定相,以石油醚(60～90℃C)-乙酸乙酯-丙酮-甲酸(6:1:1:0.5)为展开剂,在紫外光365 nm下检识大黄素、酸模素、大黄酚、大黄素甲醚。薄层图谱显示,在与对照品相同位置处,供试品显示相同颜色的斑点,样品各成分分离较好,Rf大黄酚-8-O-β-D葡萄糠苷=0.59,Rt大黄素=0.26,Rf酸模素=0.46,Rf大黄酚=0.54,Rf大黄素甲醚=0.62,Rf值均在0.2～0.8之间。该方法可作为金不换(网果酸模)薄层鉴别方法。3.2建立金不换(网果酸模)液相含量测定方法,明确其生长年限、采收时间采用高效液相色谱法建立了金不换(网果酸模)含量测定方法。通过对色谱柱、流动相、检测波长进行考察,确定含量测定条件为:色谱柱Agent Extend-C18(250×4.6mm,5μm),254nm波长处二极管阵列检测器检测,流动相为:A 甲醇,B 0.1%甲酸,梯度洗脱,0～14 min,45%～60%A,14～25 min,60%～86%A,25～30 min,86%～100%A,30～35 min,100%A。流速11 mL/min,柱温25℃,进样量5μL。通过筛选供试品溶液提取方法、溶剂、溶剂体积、提取时间,确定供试品溶液制备方法为:金不换药材粉末(过50目筛)1.0g,加甲醇40 mL,超声提取1h;并进行方法学考察,标准曲线、精密度、稳定性、重复性、加样回收均符合含量测定要求。对采集的16批金不换(网果酸模)中大黄酚-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素-8-β-D-吡喃葡萄糖苷、酸模素、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量进行测定,含量范围分别为0.06%～0.71%、0～0.27%、0.10%～0.65%、0.01%～0.06%、0.07～0.43%、0.01%～0.04%。上述 6 个成分可作为金不换(网果酸模)含量控制指标。同时,对不同生长年限、不同采收期、不同地块样品含量对比分析,认为金不换(网果酸模)最佳采收年限为2年,适宜在初春或夏末初秋采集。3.3建立金不换(网果酸模)指纹图谱采用液相色谱法,对16批金不换(网果酸模)开展指纹图谱研究。结果显示,16批次金不换(网果酸模)在254nm波长下,共获得10个共有峰,各色谱峰分离度较好,平均相似度为0.91。对比分析不同地块、不同生长年限、不同采收季节样品含量发现,金不换(网果酸模)HPLC指纹图谱相似度虽有变化,但均大于90%。本文所建立金不换(网果酸模)的指纹图谱特征性及专属性强,可用于全面控制金不换的质量。4金不换(网果酸模)制剂的研究4.1优化金不换(网果酸模)提取方法,确定最佳工艺参数采用L9(34)正交设计和单因素考察,以金不换(网果酸模)主要成分总提取率和抑菌环为考察指标,对金不换(网果酸模)水提醇沉工艺和醇提取工艺进行对比筛选,同时按荆州医院金不换冲剂的生产工艺制备金不换样品。实验结果显示,金不换(网果酸模)最佳醇提取工艺为药材加6倍量75%乙醇回流提取90 min,提取3次,酸模素及蒽醌类总提取率为0.73%,明显高于水提工艺的0.24%、水提醇沉工艺的0.28%和荆州原冲剂工艺的0.24%,6个成分转移率为84.11%,高于水提工艺的27.68%、水提醇沉工艺的33.08%和荆州冲剂工艺的27.68%,因此,确定金不换的提取工艺为75%乙醇回流提取,最佳工艺条件为饮片加6倍量75%乙醇回流提取90 min,提取3次。4.2制备金不换胶囊剂按2015版《中国药典》(通则0103),制成金不换乙醇提取物胶囊剂。水分含量、装量差异、崩解时限、稳定性均符合《中国药典》的要求。胶囊剂规格:0.49 g/粒,服用方法:3次/日,3粒/次。4.3建立金不换胶囊剂HPLC含量测定方法采用高效液相色谱法建立了金不换胶囊含量测定方法。金不换胶囊内容物主要含有大黄酚-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素-8-β-D-吡喃葡萄糖苷、酸模素、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚等成分,3批金不换胶囊6个成分平均含量分别为3.20%、0.40%、0.23%、0.10%、1.03%、0.25%,总含量5.21%。该研究结果为金不换胶囊剂质量控制提供了科学依据。4.4建立金不换胶囊剂的薄层鉴别方法对金不换(网果酸模)胶囊中5个成分进行薄层鉴别。参照金不换(网果酸模)饮片薄层鉴别方法进行检识。薄层图谱显示,供试品色谱在与对照品色谱相同位置上,显相同颜色的荧光斑点,同时,各荧光斑点分离度较好,Rf大黄酚-8-O-β-D-葡萄糖苷=0.59,Rf大黄素=0.26,Rf酸模素=0.46,Rf大黄酚=0.54,Rf大黄素甲醚=0.62,Rf值均在 0.2～0.8之间。上述5个成分可作为金不换(网果酸模)胶囊剂薄层鉴别成分。5开展金不换(网果酸模)急性毒性研究在无法得到金不换(网果酸模)的半数致死量(LD50)情况下,进行最大耐受量实验,结果显示:小鼠灌胃量等同人服用生药量的250倍,远大于100倍,表明金不换(网果酸模)75%乙醇提取物毒性很小。6金不换(网果酸模)对胃幽门结扎大鼠胃酸、胃蛋白酶的影响采用幽门结扎法考察金不换(网果酸模)75%乙醇提取物对大鼠胃酸、胃蛋白酶的影响。实验结果表明,各给药组均具有降低胃溃疡大鼠胃液总酸度、每小时总酸排出量和胃组织蛋白酶活力的作用,金不换(网果酸模)高剂量组联合奥美拉唑(西药)抑制胃酸、胃蛋白酶分泌能力在各给药组中最强,其对胃酸、胃蛋白酶的抑制作用优于阳性药奥美拉唑和单味中药金不换(网果酸模),说明金不换(网果酸模)高剂量组联合奥美拉唑具有增效作用。
【学位授予单位】：中国中医科学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R284;R285
【图文】：

图３－１酸模素及游离蒽醌的薄层鉴别逡逑１．大黄素２．酸模素３．大黄酚４．大黄素甲醚５供试品逡逑２．３．２－８－０－－Ｄ－

金不换（网果酸模）药材及科研制剂的基础研究

图３－２大黄酚－８－０－Ｐ－Ｄ－葡萄糖苷的薄层鉴R%逡逑１．大黄酚－８－０－Ｐ－Ｄ－葡萄糖苷２．供试品逡逑

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