化瘀祛痰方调节线粒体能量代谢干预AS家兔肝脏脂质沉积的分子机制

发布时间：2020-07-04 07:34

【摘要】：目的:以线粒体能量代谢为切入点,探讨化瘀祛痰方对动脉粥样硬化家兔肝脏脂质沉积的影响及机制,丰富“痰瘀论治”AS的科学内涵。材料与方法:90只SPF级健康雄性新西兰白兔,适应性喂养2周后,随机分为正常对照组、模型组、化瘀祛痰方高剂量组、化瘀祛痰方中剂量组、化瘀祛痰方低剂量组、辛伐他汀组,每组15只。正常对照组喂饲普通饲料同时耳缘静脉注射生理盐水,其他组喂饲高脂饲料同时耳缘静脉注射牛血清白蛋白生理盐水溶液造动脉粥样硬化模型,各组均自由摄食,饮水不限。8周后,各治疗组给予相应药物进行干预治疗,给药剂量按照人和动物体表面积折算系数进行换算。正常对照组与模型组给予相同体积的生理盐水,灌胃给药,每天1次,连续给药4周后取材。全自动生物化学分析仪检测血清胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的含量;HE染色、油红O染色,观察肝组织形态学改变;比色法检测家兔肝脏线粒体呼吸链酶复合物活性;Blue-Native-Page法检测线粒体呼吸链酶复合物含量;ELISA法检测肝脏ATP含量;PCR array法检测肝脏线粒体能量代谢相关基因m RNA变化情况;Western Blot法检测线粒体能量代谢相关蛋白。结果:1.化瘀祛痰方对AS家兔血脂水平的影响与正常对照组相比,模型组家兔血清中TC、TG、LDL-C显著升高(P0.01),HDL-C显著降低(P0.01);与模型组相比,各治疗组家兔血清中TC、TG、LDL-C显著降低(P0.01),HDL-C显著升高(P0.01),其中以化瘀祛痰方高剂量组与辛伐他汀组治疗效果较佳(P0.01或P0.05)。2.化瘀祛痰方对AS家兔肝脏组织形态学变化及肝脏脂质沉积的影响与正常对照组相比,模型组家兔肝脏组织细胞肿胀明显、大量脂肪空泡清晰可见,胞浆内有明显的橘红色脂滴蓄积;与模型组相比,各给药组肝脏脂肪空泡样变性及脂质沉积均有不同程度改变。其中以化瘀祛痰方高剂量组与辛伐他汀组改善肝脏脂质沉积效果最佳。因此后续实验仅选择治疗效果较佳的化瘀祛痰方高剂量组进行下一步的研究。3.化瘀祛痰方对AS家兔肝脏线粒体能量代谢的影响线粒体呼吸链酶复合物活性实验结果显示:与正常对照组相比,模型组肝脏线粒体呼吸链酶复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ活性降低(P0.05),与模型组比较,化瘀祛痰方高剂量组与辛伐他汀组肝脏线粒体呼吸链酶复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ活性升高(P0.05)。Blue-Native-Page结果显示:与正常对照组相比,模型组肝脏线粒体呼吸链酶复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ含量降低(P0.05),与模型组比较,化瘀祛痰方高剂量组与辛伐他汀组肝脏线粒体呼吸链酶复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ含量升高(P0.05)。ELISA结果显示:与正常对照组相比,模型组家兔肝脏内ATP生成减少(P0.01);与模型组相比,化瘀祛痰方高剂量组与辛伐他汀组家兔肝脏组织ATP生成增加(P0.05或P0.01)。4.化瘀祛痰方对线粒体能量代谢相关基因m RNA及蛋白的影响PCR array结果显示:与正常对照组相比,模型组73个基因m RNA发生改变(上调67个,下调6个);与模型组相比,化瘀祛痰方组80个基因m RNA发生改变(10个上调,70个下调)。在模型组上调的67个基因m RNA中,有46个基因m RNA在治疗后表达趋势发生逆转。Western Blot结果显示:与正常对照组相比,模型组NDUFS1、NDUFS2、UQCRC1、UQCRC2、ATP5C1、COX4I1、COX6B1蛋白表达含量下降(P0.05或P0.01);与模型组相比,化瘀祛痰方组NDUFS1、NDUFS2、UQCRC1、UQCRC2、ATP5C1、COX4I1、COX6B1蛋白表达升高(P0.05或P0.01)。结论:1.化瘀祛痰方能够降低AS家兔血脂水平改善其肝脏脂质沉积。2.化瘀祛痰方能够通过增加肝脏线粒体呼吸链酶复合物活性及含量表达进而促进ATP生成量。3.化瘀祛痰方可能通过调节线粒体能量代谢相关基因m RNA与蛋白的表达,以及改善AS家兔肝脏脂质沉积,进而防治动脉粥样硬化。
【学位授予单位】：辽宁中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5
【图文】：

- 26 -图 1 各组 AS 家兔血清血脂变化情况2. 各组 AS 家兔肝脏组织 HE 染色结果实验结果显示：正常对照组肝细胞索条理清晰排列整齐，肝窦正常，核圆、大、居中，未见小叶内炎症细胞浸润；与正常对照组相比，模型组肝细胞体积增大，肿胀变圆，胞浆内出现大量脂肪空泡，脂肪变性明显，肝细胞排列杂乱；与模型组相比，各治疗组肝细胞的体积大小有所恢复，细胞肿胀明显减轻，空泡变少，肝细胞脂肪变性程度减轻，其中以化瘀祛痰方高剂量组与辛伐他汀组改善肝脂肪变性效果最为显著。（见图 2）

图 2 各组 AS 家兔肝脏 HE 染色结果（200x）3. 各组 AS 家兔肝脏油红 O 染色结果实验结果显示：与正常对照组相比，模型组肝细胞内出现明显的橘红色脂滴，脂滴数量多弥漫脏脏组织内；与模型组相比，各治疗组胞浆内橘红色脂滴蓄积情况呈不同程度减轻，脂肪变性程度有所恢复。其中以化瘀祛痰方高剂量组与辛伐他汀组治疗效果最佳。（见图 3）。

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本文编号：2740835