覆盆子糖蛋白GP3抗衰老活性及其对Klotho基因表达的调控研究

发布时间：2020-07-05 14:42

【摘要】：覆盆子是蔷薇科悬钩子属植物华东覆盆子的近成熟干燥果实,具有“益肾、固精、缩尿”之功效。课题组前期采用水提醇沉法从覆盆子中分离纯化得到4个糖蛋白分子,通过体外实验研究表明,其中3号糖蛋白分子(GP3)的抗氧化活性最强。为了进一步探讨覆盆子的抗衰老活性,本论文以覆盆子糖蛋白GP3为研究对象,结合Klotho基因在抗衰老方面的重要作用,系统研究覆盆子糖蛋白GP3的抗衰老活性及其对小鼠肾组织中Klotho基因表达的调控作用。研究内容主要分为以下两个方面:1、覆盆子糖蛋白GP3体外抗衰老活性研究。测定糖蛋白GP3的总还原能力和羟自由基清除率以及对TCMK-1细胞作用后SOD、GSH-Px、CAT、MDA的含量。通过CCK-8法和β-半乳糖苷酶染色法分别测定糖蛋白GP3对H_2O_2损伤下TCMK-1、NRK-52E细胞的存活率及抗衰老活性的影响。结果表明,糖蛋白GP3能增加氧化损伤状态下的TCMK-1、NRK-52E细胞的存活率,并且能明显改善TCMK-1细胞内SOD、GSH-Px、CAT、MDA的生理指标,存在一定的量效关系。2、覆盆子糖蛋白GP3体内抗衰老活性及其对Klotho基因表达的调控研究。通过腹腔注射D-半乳糖的方法建立小鼠衰老模型,确定建模成功后口服给药30天,处死小鼠。测定脏器系数及小鼠血清、心脏、肝脏、脾脏、肾脏的生理学指标,并对肝肾组织进行病理切片,同时提取小鼠肾脏中的总RNA和蛋白质,并通过RT-PCR和Western-blot方法检测Klotho基因的表达量。结果表明,糖蛋白GP3能有效改善衰老小鼠肾组织器官的病理状态,使肾储备能力得到修复,从而起到补肾的作用,并且能明显改善衰老小鼠体内SOD、GSH-Px、CAT、MDA的生理指标,具有明显的抗衰老活性;同时还能明显增加小鼠肾组织中抗衰老基因Klotho的表达量。综上所述,覆盆子糖蛋白GP3具有显著的抗氧化及抗衰老活性,对抗衰老基因Klotho起到明显的调节作用,由此推断糖蛋白可能是覆盆子延缓衰老的物质基础,而覆盆子抗衰老的机制可能是:(1)通过清除体内有害的自由基,从而改善机体器官的生理状态,使各组织器官的功能得到修复,特别是对肾组织的修复可能与抗衰老作用直接相关;(2)通过调节体内抗衰老基因Klotho的表达水平而实现其抗衰老作用。这一结果为覆盆子作为传统抗衰延寿方中的重要一员提供科学依据,同时也为“补肾是抗衰老的基本途径”这一中医观点提供实验基础。
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5
【图文】：

示意图,膜型,分泌型,示意图

图 1.1 膜型 Klotho 与分泌型 Klotho 的示意图[17]Klotho 基因表达的调控及其功能tho 基因在调控衰老以及增龄性相关疾病中扮演着必不可少的角色Klotho 基因能调节氧化应激，防止氧化损伤。例如，Klotho 基因能氧化损伤后人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的存活率，增强细胞的减少细胞炎症反应、衰老和凋亡[18-19]；相反，Klotho 基因缺陷不马神经元的氧化损伤，而且能引起体内的磷酸盐滞留[20]。另外，CKD）野生型小鼠中检测到肾脏中具有较低的 Klotho 水平，而 K达转基因小鼠肾脏的功能得到提高[21]。同样，在自发型高血压大注损伤模型大鼠[22]、糖尿病肾病大鼠[23]、慢性心衰大鼠[24]以及高下的大鼠[25]中 Klotho 基因的表达量减少。研究已经表明，增加小因表达水平能够延长寿命（约为正常小鼠的 20~30%）[26]，增强认抗肾脏相关疾病的发生[28-30]，对肺部疾病[31]、血管钙化[32]、糖尿病[34]都具有改善作用，同时也能作为体内肿瘤抑制剂等[35-38]，另外

覆盆子,糖蛋白,希夫试剂

图 2.1 紫外检测覆盆子糖蛋白M 1 2图 2.2 SDS-PAGE 分析覆盆子糖蛋白 GP3（M：蛋白质 Marker；1：考马斯亮蓝染色；高碘酸－希夫试剂染色）2.4 覆盆子糖蛋白 GP3 总还原能力及对羟自由基清除率实验的测

【参考文献】