青鹏软膏治疗急慢性皮炎的细胞及分子机制研究

发布时间：2020-07-06 12:08

【摘要】：青鹏软膏作为一种藏药外用制剂,方中包含棘豆、亚大黄、铁棒锤、诃子(去核)、余甘子、安息香、宽筋藤和人工麝香等九味药材。在藏医学中,青鹏软膏用于活血化瘀、消炎止痛。治疗痛风、风湿、类风湿关节炎,热性“冈巴”、“黄水”病变引起的关节肿痛、扭挫伤肿痛、皮肤瘙痒、湿疹等疾病。其中,黄水病原意不完全是指一般皮肤湿疹、疥疮、疔疖等病变的渗出物。黄水略相当于中医的湿及湿热,存在于全身各处,在皮肤及关节处较多,病变在皮肤导致瘙痒;在关节可引起关节肿胀;在内脏可引起内脏堆积黄水、脏腑脓疡等。黄水本性既不属热,也不属寒,病变后寒热两性俱全。皮肤瘙痒则属于藏医中“黄水病”的范畴,藏医认为皮肤瘙痒是由于饮食起居发生不及、过甚、相反等异常变化使三因紊乱,引起黄水偏盛或偏弱导致皮肤瘙痒,因此藏医治疗皮肤瘙痒的方法以活血通络、平黄水为原则。变应性接触性皮炎(Allergic contact dermatitis,ACD)是一种慢性复发炎症性皮肤病。Th免疫细胞的功能失调和IgE的产生被认为是ACD发病机制中的最重要的因素。本研究在阅读大量文献的基础上,发现青鹏软膏在临床上对皮肤瘙痒类疾病疗效显著,并尝试构建ACD模型得出青鹏软膏能改善该项疾病的瘙痒程度,但该药物在治疗变应性接触性皮炎的作用机制研究鲜有报道。论文基于网络药理学,以动物实验支撑,从载体、分子、基因等层面对青鹏软膏治疗组胺引起的急性痒和变应性接触性皮炎中的作用机制进行了系统研究。收集青鹏软膏中九味药材中已知化合物进行网络药理学分析,在网络药理学的基础上融合“疾病-表型-基因-药物”多层次信息,理解疾病与生物分子的关系。采用“疾病/证候表型-生物分子网络”的思想,通过BATMAN-TCM搭建的平台,使用靶标预测的方法,基于相似性来预测传统中药组成化合物的潜在靶标。实质是通过与己知的药物靶标的相互作用比较来计算相似性,并对潜在的药物靶标相互作用进行排序。从实验结果中我们获知藏药青鹏软膏可能通过MAPK和NF-κB通路起作用,并通过PIK3R3、PIK3CA、NFκB1、EGFR、KIT、ESR1、NR3C1、IL-4、IL-6、IL-10和TNF等11个潜在作用靶点达到治疗急慢性皮炎的作用。本课题构建组胺引起的动物急性痒模型和SADBE诱导的变应性接触性皮炎模型,通过对行为学挠痒数进行统计,发现藏药青鹏软膏对于两种瘙痒均能起到治疗作用。其中在组胺引起的小鼠急性痒的实验中,发现青鹏软膏能够显著性降低血清中IgE、组胺、TNF-α、IL-1β、IL-4的含量,并且在基因层面显著抑制皮肤中IL-4和TSLP中的mRNA水平。从而得出青鹏软膏治疗组胺引起的急性瘙痒可能通过Th1/Th2型适应性免疫反应进行调节,具有抗炎、抗过敏与止痒的功效。为探究青鹏软膏治疗变应性接触性皮炎的作用机制,结合网络药理学提供的相关通道、细胞因子以及在显著降低ACD小鼠挠痒数的实验基础上,发现青鹏软膏能降低ACD小鼠血清中IgE、TNF-α、IL-4和IL-5等细胞因子的含量,达到抗炎功效。在基因水平,发现青鹏软膏通过调节与痒相关的TPRV1、TPRA1、TRPV4等瞬时离子通道的mRNA水平达到止痒疗效,进一步研究痒分子如GRP、TSLP和MrgprA3的mRNA水平,得出青鹏软膏能够显著性抑制痒分子在皮肤或背根神经节中的mRNA水平,验证青鹏软膏的止痒疗效。Western blot结果证实,青鹏软膏对ACD模型小鼠脊髓和皮肤组织磷酸化的P38蛋白和磷酸化Erk蛋白的磷酸化水平有下调作用,证明青鹏软膏改善变应性接触性皮炎可能通过抑制MAPK信号通路活化实现。综上所述,藏药青鹏软膏处方组成独特,在治疗皮肤瘙痒中有显著疗效,是一类具有抗炎症、抗过敏和止痒效果的外用药,不仅能够避免口服给药对肝肾等产生的损害,而且通过拮抗与过敏及炎症有关的信号通路、干预与炎症有关的免疫活性分子途径,阻断与痒感觉相关的信号分子通路,从而达到了治疗的作用。通过对其作用机制的研究,为治疗皮肤瘙痒类疾病的新药提供了参考,具有良好的临床应用前景。
【学位授予单位】：中南民族大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285
【图文】：

网络图,靶点,软膏,皮炎

从青鹏软膏靶点-急慢性皮炎靶点交互相关网络图中我们预测得出，1410 个软膏潜在靶点，如 TLR4、AKT、TRPA1、TRPV3、TRPM8 等；264 个急慢性潜在靶点，如 IL-10、IL-12A、IL-17A、STAT3、STAT4 等；11 个药物与疾病的潜在关键蛋白与细胞因子，如 PIK3R3、PIK3CA、NFκB1、EGFR、KIT、ESRR3C1、IL-4、IL-6、IL-10 和 TNF 等。

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段与 DC 得激活状态相关[51]，因此，青鹏软膏治疗 SADBE 引起的慢性皮炎可能与MAPK 信号通路相关。从网络药理学的结果分析得出，青鹏软膏治疗急慢性皮炎可能通过潜在作用靶点如 TNF、NF-κB 和 RTK 参与 MAPK 信号通路进行调节。图 2.2 为青鹏软膏作用靶点与急慢性皮炎作用靶点在 MAPK 通路中的显示。

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最终通过蛋白酶体降解 IκBα。然后将活化的 NF-κB 转移到细胞核中，在细胞核中与特定的称为响应元件（RE）的 DNA 序列结合。然后 DNA / NF-κB 复合物通过召集其他蛋白质，例如共激活因子和 RNA 聚合酶，将下游 DNA 转录成 mRNA。mRNA 被翻译成蛋白质，导致细胞功能的改变[53-55]。通过 NF-κB 信号通路途径参与的抗炎作用的调节机构被广泛报道，近年来，有研究表明在 ACD 模型中，与瘙痒密切相关的瞬时感受态离子通道 TRPA1 在NF-κB 信号通路激活导致炎症加重中起重要的作用。通常，炎症反应是许多炎症因子参与的多种趋化因子网络，如跨膜受体 ERK 和 TLR4 分子的关键细胞信号与炎症密切相关，ACD 的病理机制被广泛讨论。因此，综合了网络药理学的结果，我们推测青鹏软膏治疗急慢性痒可能通过 NF-κB 信号通路途径发挥作用。网络药理学结果显示，从图 2.3 青鹏软膏作用靶点与急慢性皮炎作用靶点在 NF-κB 通路中的可以发现，青鹏软膏可能通过 TNF-α 和 p50 等靶点参与了 NF-κB 信号通路

【参考文献】