基于“肾虚髓空”证候要素的地黄饮子干预阿尔茨海默病和帕金森病的方证效应机制研究

发布时间：2020-07-06 13:24

【摘要】：目的:探求地黄饮子干预阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)和帕金森病(Parkinson disease,PD)肾虚髓空证模型大鼠的方证效应机制,部分揭示地黄饮子干预AD与PD肾虚髓空证异病同治的生物学机制。方法:(1)通过复习文献中传统医学和现代医学对AD、PD病因病机和发病机制的理论认识,梳理疾病、证候、证候要素间的关系,阐明地黄饮子治疗AD与PD肾虚髓空证异病同证的依据。(2)复制病证结合动物模型:利用氢化可的松溶液灌胃的方法复制中医肾虚髓空证动物模型,同时结合海马CA1区定位注射Aβ_(25-35)多肽片段复制AD疾病动物模型,颈背部皮下注射鱼藤酮溶液复制PD疾病动物模型,最终分别制备为AD、PD病证结合模型,造模成功后用地黄饮子对AD、PD病证结合模型进行干预。(3)采用行为学测试法、酶联免疫法、HE染色、蛋白免疫印迹法和实时荧光定量反转录--聚合链式反应技术,观察AD与PD病证结合动物模型的行为学变化、形态学变化、HPA轴功能变化、脑组织抗氧化水平、泛素-蛋白酶体系统(ubiquitin proteasome system,UPS)功能变化及地黄饮子的干预作用。结果1.理论研究:(1)近代医家认为AD与PD均属衰老性疾病,病位在脑,肾虚是其共同的证候要素,属中医学异病同证的范畴。补肾名方—地黄饮子具有滋肾阴,补肾阳,化痰开窍的作用,可用于AD、PD肾虚髓空证的治疗。(2)现代医学认为衰老引起的泛素蛋白酶体系统功能衰退是AD与PD共同的发病机制之一,而现代中西医结合关于肾实质的研究成果更将衰老定义为生理性肾虚,故生理性肾虚与泛素蛋白酶体系统功能的衰退密切相关。2.实验研究:(1)行为学测试结果:AD模型组大鼠学习记忆能力及空间探索能力受损严重,地黄饮子可以显著改善AD干预组大鼠的学习记忆能力;PD模型组大鼠四肢的肌力及协调平衡能力降低,地黄饮子可以明显提高PD干预组大鼠四肢的肌力及协调平衡能力。(2)HPA轴功能检测结果:AD模型组、PD模型组大鼠血清中CTH、ACTH、CORT含量显著升高,证明肾虚髓空证候模型制备成功,经地黄饮子干预后,AD干预组、PD干预组大鼠血清中CTH、ACTH、CORT含量显著降低,表明地黄饮子可以抑制HPA轴功能虚性亢进,对AD、PD肾虚髓空证候模型具有干预作用。(3)脑组织抗氧化水平检测结果:AD模型组、PD模型组大鼠脑匀浆中MAO、Lipo含量明显升高,表明脑组织抗氧化水平降低,衰老模型诱导成功,经地黄饮子干预后AD干预组、PD干预组大鼠脑组织中MAO、Lipo含量显著降低,表明地黄饮子可以提高AD、PD干预组大鼠脑组织抗氧化水平,抑制大鼠脑组织老化,对AD、PD肾虚髓空证模型具有干预作用。(4)HE染色结果:AD模型大鼠海马CA1区神经细胞层数减少,细胞空泡样变性显著,地黄饮子可增加AD干预组大鼠海马CA1区神经细胞层数,减轻细胞空泡样变性;PD模型大鼠黑质区DA能神经元数目减少,胶质细胞增多,地黄饮子使PD干预组大鼠黑质区DA能神经元数目增多,胶质细胞数目减少。(5)RT-PCR检测UPS mRNA检测结果:AD模型—海马、PD模型—黑质、纹状体中Ub、E1、UCH-L1及20S蛋白酶体mRNA的表达量降低,表明UPS功能降低,经地黄饮子干预后,AD干预组—海马、PD干预组—黑质、纹状体中Ub、E1、UCH-L1及20S蛋白酶体mRNA的表达量增加,表明地黄饮子可以提高各组大鼠UPS的功能。(6)Western-blot检测UPS蛋白表达结果:AD模型—海马、PD模型—黑质、纹状体中Ub、E1、UCH-L1及20S蛋白酶体的蛋白表达量减少,表明UPS功能减退,经地黄饮子干预后,AD干预组—海马、PD干预组—黑质、纹状体中Ub、E1、UCH-L1及20S蛋白酶体蛋白的表达量增加,表明地黄饮子可以改善各组大鼠的UPS功能。结论:1.给予Wistar大鼠氢化可的松溶液灌胃结合海马CA1区定位注射Aβ_(25-35)多肽片段可以成功复制阿尔茨海默病肾虚髓空证病证结合模型。2.给予Wistar大鼠氢化可的松溶液灌胃结合颈背部皮下注射鱼藤酮溶液可以成功复制帕金森病肾虚髓空证病证结合模型。3.以衰老(生理性肾虚)引起的HPA轴功能虚性亢进、脑组织抗氧化水平降低、UPS衰退是AD、PD模型大鼠肾虚髓空证的内在机制,其中地黄饮子改善UPS降解功能是其干预AD与PD肾虚髓空证--异病同治的部分生物学机制。4.地黄饮子干预AD和PD肾虚髓空证共同的方证效应机制可能是:调控HPA轴功能虚性亢进、提高脑组织抗氧化水平、恢复泛素蛋白酶体系统降解功能。
【学位授予单位】：山西中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5;R-332
【图文】：

图 1 AD 大鼠空间探索测试结果注：与正常对照组比较，**P <0.01；与假手术组比较，△△P <0.01）AD 大鼠 HPA 轴检测结果 3 可知：与正常对照组相比，假手术组大鼠血清中 ACTH、CORT、CR

AD大鼠HPA轴功能测定结果

图 3 AD 各组大鼠 MAO、Lipo 检测结果注：与正常对照组比较，**P <0.01；与假手术组比较，△△P <0.01（四）AD 大鼠海马组织镜检结果正常对照组海马组织 CA1 区细胞排列紧密整齐，层数为 3-4 层，核仁深染

【参考文献】

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本文编号：2743693