岩黄连指纹图谱及其抗肝纤维化的血清代谢组学研究

发布时间：2020-07-06 18:02

【摘要】：目的:1.建立岩黄连药材指纹图谱,并进行多成分定量分析,为岩黄连品种鉴定及质量评价提供依据。2.基于代谢组学的方法研究岩黄连抗肝纤维化的作用,从而揭示岩黄连抗肝纤维化的作用机制。方法:1.采用高效液相色谱(HPLC)对岩黄连提取工艺进行优化,并进行方法学考察。2.应用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A)”评价10批岩黄连样品的相似度,建立指纹图谱,并对岩黄连中黄连碱、脱氢卡维丁、巴马汀和小檗碱4个成分进行定量分析。3.将雄性SD大鼠40只,随机分为空白对照组(n=10)和造模组(n=30)。空白对照组灌胃给予橄榄油,造模组大鼠灌胃给予50%CCl4橄榄油溶液每周2次,共10周。于造模第7周开始灌胃给药,分成空白组、模型组、阳性对照组、岩黄连给药组,给药4周。4.采用血清生化指标谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLB)、总蛋白(TP),肝组织中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD),和肝组织病理学检查评价岩黄连的干预作用。5.采用基于核磁共振的代谢组学技术,结合多元统计分析,寻找模型组和空白组血清代谢组分差异,分析其差异物质与肝纤维化可能存在的关系,旨在发现与抗肝纤维化相关的潜在生物标志物及可能的靶点;进一步表征岩黄连对模型大鼠血清内源性代谢产物的变化规律,发现与抗肝纤维化药效相关的潜在生物标志物及可能的靶点。结果:1.建立的指纹图谱共有15个共有峰,10批岩黄连样品相似度在0.940以上。2.岩黄连中黄连碱、脱氢卡维丁、巴马汀和小檗碱的平均含量分别为0.50±0.17 mg/g、10.25±1.46 mg/g、6.02±1.78 mg/g、2.17±0.41mg/g。3.经过岩黄连干预的肝纤维化大鼠血清中ALT、AST和ALP明显降低(P0.05),ALB/GLB明显升高(P0.05),大鼠肝组织中MDA明显降低(P0.001),SOD明显升高(P0.001),大鼠肝组织病变程度改善。4.CCl4诱导的肝纤维化大鼠血清中找到13个潜在的生物标志物,其中乳酸、丙氨酸、精氨酸、乙酸、氮乙酰糖蛋白、肌酸、胆碱的水平升高,脂质、亮氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、氧乙酰糖蛋白和葡萄糖的水平降低。主要影响氨基酸代谢、糖类代谢、脂质代谢和其他代谢。5.岩黄连对CCl4所致的肝纤维化大鼠血清中丙氨酸,乙酸和肌酸有下调作用,对脂质,亮氨酸和氧乙酰糖蛋白有上调作用。通过纠正CCl4诱导肝纤维化引起的缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸代谢,丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢,精氨酸和脯氨酸代谢,糖类代谢紊乱,及脂质过氧化。结论:1.建立了岩黄连指纹图谱并结合多成分定量测定能较全面地反映岩黄连的质量,可作为岩黄连药材质量控制的科学依据。2.岩黄连能改善肝纤维化大鼠的血清生化指标和肝组织生化指标及组织病理改变。3.CCl4诱导肝纤维化模型可引起大鼠血清代谢轮廓显著变化,明显扰动氨基酸代谢、糖类代谢、脂质代谢及其他代谢,岩黄连对这些受扰动的代谢通路可以进行回调。
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5;R284
【图文】：

指纹图谱,岩黄连,指纹图谱

21图 1-6.岩黄连的指纹图谱和对照指纹图谱（CSR）Fig. 1-6 HPLC fingerprint and reference fingerprint(CSR) for 10 batches of CS

岩黄连,化学成分含量,热图,指标成分

图 1-7. 10 批岩黄连共有峰相对峰面积（A）及其 4 个化学成分含量（B）的热图Fig.1-7 The heat map of peak area of common peak (A) and the content of four components (B) in10 batches of CS2.6 岩黄连中 4 个指标成分的含量测定2.6.1 对照品溶液的制备

岩黄连指纹图谱及其抗肝纤维化的血清代谢组学研究

不同组别大鼠血清ALT、AST和ALP的比较

【参考文献】