基于脂质组学的清心滋肾汤治疗绝经综合征的机制研究

发布时间：2020-07-07 01:18

【摘要】：目的:本研究采用脂质组学分析方法,观察去卵巢大鼠与正常大鼠血浆的脂质代谢特征,筛选与绝经期大鼠有关的差异脂质代谢物,通过脂质代谢物相对含量的变化,分析绝经期大鼠体内的脂质代谢状态以及与老年性疾病的联系,从代谢物含量变化和代谢通路深入研究清心滋肾汤对绝经期的脂质代谢调控,期望从脂代谢物水平上揭示清心滋肾汤对绝经综合征调控机制,为进一步开发利用清心滋肾汤奠定理论基础。方法:将4月龄雌性SD大鼠60只,随机分为空白组和去卵巢组,空白组行假手术即只打开盆腔,不切除卵巢;去卵巢组均行“双侧卵巢切除术”,通过大鼠阴道脱落细胞涂片观察造模结果。术后将去卵巢大鼠随机分为5组:模型组(M组)、清心滋肾汤低剂量组(D组)、清心滋肾汤中剂量组(Z组)、清心滋肾汤高剂量组(G组)、莉芙敏组(Y组),加上空白组(K组),共6组。分别灌胃4周,末次给药禁食24小时后,用10%水合氯醛按照每公斤体重0.35ml对大鼠进行麻醉,行颈动脉取5ml血至采血管,离心机以3000转/分速度离心20分钟,取血清,备用。采用超高效液相色谱-线性离子阱/静电场轨道阱结合高分辨质谱法(UPLC/LTQ-Orbitrap-MS)对各组血浆进行检测。通过主成分分析(PCA)、正交-偏最小二乘法分析(OPLS-DA)以及差异倍数(FC)寻找模型组与空白组之间的差异脂质代谢物,根据检出的精确分子质量和质合比信息,同时结合碎片离子信息,搜索chemspider数据库,完成代谢产物的鉴定,将所得的差异代谢物输入KEGG数据库查找相关代谢通路。运用多元统计分析比较这些差异脂质代谢物在清心滋肾汤各剂量组及莉芙敏组大鼠体内相对含量是否有变化,由此推测清心滋肾汤对去卵巢大鼠的治疗作用机制。结果:1.采用PCA方法对模型组与空白组大鼠样本建模,大部分样本集中分布于散点图的椭圆形95%置信区)区域内,有一定的分离趋势,但仍存在交叉重叠,进一步建立OPLS-DA模型,参数分别为:血浆(正离子模型):R2Y=0.996,Q2=0.789;血浆(负离子模型):R2Y=0.999,Q2=0.694。R2Y表示模型的解释率,Q2表示模型的预测率。上述参数可以看出本实验建立的模型有较高的可靠性,OVX大鼠模型建立成功。2.对模型组和空白组大鼠血浆进行脂质组学分析,以OPLS-DA模型中VIP1及单变量统计分析P0.05的脂质,并计算变异倍数(FC)1.2,作为显著性差异脂质。实验揭示了与绝经综合征相关的差异代谢物,血浆中显著性差异脂质一共9类,共76种脂质化合物。包括:12种神经酰胺(Cers),29种鞘磷脂(SMs),5种甘油三酯(TGs),5种溶血磷脂酰胆碱(LPCs),2种脂肪酸(FAs),1种血小板活化因子(PAF),其相对含量上升,与空白组对比(p0.05);4种磷脂酰甘油(PGs),4种磷脂酰丝氨酸(PSs),14种甘油二酯(DGs),其相对含量下降,与空白组对比(p0.05)。3.将差异脂质代谢物进行代谢通路查询后发现,有6条代谢通路与绝经综合征相关,包括:甘油磷脂代谢,鞘脂代谢,甘油酯代谢,胆固醇代谢,醚脂代谢和不饱和脂肪酸合成。4.通过比较清心滋肾汤给药前后大鼠的脂质代谢物相对含量的变化,发现清心滋肾汤能够调控多个与绝经综合征有关的脂质差异代谢物的紊乱。鉴定出了清心滋肾汤干预去卵巢大鼠后血浆代谢相关的5类差异脂质,能够上调2种指标,下调3种指标,以上指标相对含量的差异与模型组相比存在统计学差异(p0.05)。结论:1.UPLC/LTQ-Orbitrap-MS代谢组学能够初步区分正常大鼠与绝经期大鼠两种不同的脂代谢状态。结果发现有76种差异脂质化合物的相对含量变化与绝经综合征脂代谢紊乱相关,这些代谢物的水平变化可作为与绝经相关的老年性退化性疾病的预测标记物。2.去卵巢大鼠存在甘油磷脂代谢,鞘脂代谢,甘油酯代谢,胆固醇代谢,醚脂代谢和不饱和脂肪酸合成的紊乱。3.清心滋肾汤能一定程度调节绝经综合征所引起的脂质紊乱状态,主要通过调节甘油磷脂代谢、鞘脂代谢以及甘油酯代谢发挥治疗作用。4.通过清心滋肾汤给药后这些代谢物相对含量的变化以及代谢通路的调控,揭示了清心滋肾汤一个重要的治疗机制是预防并延缓绝经后心脑血管疾病、阿兹海默症、糖尿病以及代谢性疾病的发生,为进一步的药理学研究提供思路。
【学位授予单位】：南京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5
【图文】：

Ｒ２Ｘｌｌ］邋＝邋０．３３５逦Ｒ２Ｘ［２］邋＝邋０．１５４逦ＥｌＵｐｓｃ：邋Ｈｏｔｅｌｌｍｇ＇ｓ邋Ｔ２邋（９５％）逡逑图２－３．Ｋ－Ｍ两组的ＰＣＡ得分图（ＥＳＩ邋＋）逡逑0逦＾逦——？ｋ逡逑２０－逦■邋Ｍ逡逑１0＇邋／邋＼逡逑５：逦／逦ｌ邋＼逡逑－２５邋－逦｜逦逦逦逦逦逦逦，逦逦逦，逦■逦逦，逦逦逦逦逦，逦＾逡逑－４０逦－３０逦－２０逦－１０逦０逦１０逦２０逦３０逡逑ｔ［ｌ］逡逑Ｒ２Ｘ［１］邋＝邋０．１７６逦Ｒ２Ｘ｛２］邋＝邋０．１０８逦ＥｌＵｐｓｅ：邋Ｈｏｔｃｌｌｉｉｉｇ＇ｓ邋Ｔ２邋（９５％）逡逑图２－４．邋Ｋ－Ｍ两组的ＰＣＡ得分图（ＥＳＩ邋－）逡逑３．２．２邋ＥＳＩ＋／ＥＳ卜模式下的清心滋肾汤低剂量组（Ｄ组）与模型组（Ｍ组）的ＰＣＡ分析逡逑，‘逦？Ｄ逡逑秦，——．逡逑２。：逦／逦°°0邋0邋＼逡逑＾邋＇逡逑？６０邋ｒ—Ｉ￣Ｉ￣｜￣Ｉ—Ｉ￣Ｉ￣｜￣Ｉ￣Ｉ￣Ｉ￣Ｉ—＇＇￣＇逦ｒ—ｉ￣￣Ｉ￣￣｜￣Ｉ￣￣Ｉ￣￣Ｉ￣￣｜￣Ｉ￣Ｉ■—Ｉ￣｜￣ｒ—１￣逡逑？８０逦－６０逦－４０逦－２０逦０逦２０逦４０逦６０逡逑＊１１］逡逑Ｒ２Ｘ［１］邋＝邋０．２５逦Ｒ２Ｘ［２］邋＝邋０．１３２逦Ｈｌｉｐｓｅ

图２－６．Ｄ－Ｍ两组的ＰＣＡ得分图（ＥＳＩ邋－）逡逑３．２．３邋ＥＳＩ＋ＥＳ卜ＺＭＰＣＡ

图１０．邋Ｇ－Ｍ两组的ＰＣＡ得分图（ＥＳＩ邋－）逡逑

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本文编号：2744421