参麦注射液对哮喘大鼠气道平滑肌细胞TRPA1表达及增殖的影响

发布时间：2020-07-09 16:26

【摘要】：目的探讨参麦注射液对哮喘模型大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)中瞬时受体电位通道蛋白A1(TRPA1)表达的影响及其对哮喘大鼠ASMCs增殖调节作用的可能机制。方法将30只6周龄雄性SPF级SD大鼠按随机数字表法随机分为三组:对照组、哮喘组和参麦注射液治疗组,每组10只。哮喘组和参麦注射液治疗组应用卵蛋白建立哮喘模型,参麦注射液治疗组造模的同时腹腔内每天注射2 ml参麦注射液,末次激发后留取肺组织及尾静脉血。通过HE染色检测各组大鼠气道结构的变化,并计算管壁面积WA)/管腔内周长(Pi)、支气管平滑肌面积(S)/Pi、支气管平滑肌细胞核数(N)/Pi;通过免疫细胞化学及免疫荧光鉴定ASMCs;通过RT-PCR检测TRPA1和PCNA m RNA的表达;通过Western blotting检测TRPA1蛋白的表达;通过免疫细胞化学检测PCNA蛋白的表达;通过激光共聚焦显微镜检测ASMCs内Ca2+浓度;通过CCK-8法检测各组大鼠ASMCs增殖情况;通过ELISA检测大鼠尾静脉血中IL-4、IL-5、IL-13的水平。使用SPSS 22.0进行统计学处理,多组间的比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t法。结果与对照组相比,哮喘组的大鼠气道发生重塑,气管的WA/Pi、S/Pi、N/Pi明显增高(均P0.05)。与哮喘组相比,参麦注射液治疗组的大鼠气道重塑被抑制,气管的WA/Pi、S/Pi、N/Pi显著降低(均P0.05)。与对照组相比,哮喘组大鼠ASMCs中TRPA1、PCNA的m RNA和蛋白的表达增加,细胞内Ca2+浓度增加,增殖增加,尾静脉血中IL-4、IL-5、IL-13的水平增高(均P0.05)。与哮喘组大鼠相比,参麦注射液治疗组ASMCs中的TRPA1、PCNA的m RNA和蛋白的表达明显减少,细胞内Ca2+浓度减少,增殖减少,尾静脉血中IL-4、IL-5、IL-13的水平降低(均P0.05)。结论参麦注射液可能通过抑制对细胞内Ca2+浓度和IL-4、IL-5、IL-13有调节作用的TRPA1通道的表达来防治哮喘中ASMCs的过度增殖。
【学位授予单位】：锦州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5
【图文】：

气道平滑肌细胞

试剂盒说明书进行操作，并绘制标准曲线。根据样品的 OD 值计算样品浓度，乘以稀释倍数得到样品的实际浓度。（十）统计学分析采用 SPSS 22.0 统计学软件进行数据分析。服从正态分布的计量资料用均数±标准差（ x ± s）表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t 检验。以 P<0.05 为差异有统计学意义。结果一、气道平滑肌细胞的鉴定原代培养的细胞在相差纤维镜下呈明显的“峰谷样”生长；经免疫组化染色后α-actin 阳性表达；免疫荧光染色后，细胞质中出现绿色荧光的肌丝，且细胞呈典型的梭状。经鉴定，培养的细胞为气道平滑肌细胞。见图 1。

气道重塑,大鼠,HE染色,气道

二、气道重塑的形态变化（一）HE 染色结果对照组大鼠气道黏膜完整，管腔光滑，未见损伤及增生。支气管哮喘组大鼠气道可见大量嗜酸性粒细胞浸润黏膜下层，气道壁和支气管平滑肌的厚度明显增加，气道发生重塑。而 SMI 治疗组，气道重塑明显减少，且支气管的形态结构接近正常（见图 2）。

哮喘,大鼠,统计学意义,意义

和 PCNA mRNA 的表达哮喘组大鼠 ASMCs 中 TRPA1 和 PCN意义（P<0.05）；与哮喘组相比，SMI mRNA 的表达减少，差异有统计学意义道平滑肌组织 TRPA1、PCNA

【参考文献】