白藜芦醇调控SUMO1修复小鼠炎症性肠病的作用机制研究

发布时间：2020-07-10 17:08

【摘要】：目的构建白藜芦醇修复炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)的小鼠模型,检测SUMO1(small ubiquitin-related modifier 1,SUMO1)及其相关信号通路在阴性对照组小鼠、IBD模型组和白藜芦醇修复的IBD组小鼠结直肠黏膜组织中的表达,探讨白藜芦醇调控SUMO1修复炎症性肠病的作用及其机制。方法1.建立白藜芦醇修复小鼠IBD模型选择6周龄(20g左右)的雄性BALB/c小鼠,构建葡聚糖硫酸酯钠(dextran sulfate sodium,DSS)诱导的小鼠IBD模型组(模型组)、白藜芦醇处理组(实验组)和阴性对照组。模型组小鼠持续饮用含3%DSS的双蒸水,实验组小鼠持续饮用含3%DSS的双蒸水的同时每天灌胃白藜芦醇(50mg/kg),而阴性对照组小鼠则饮用双蒸水。每天在规定的时间点称量小鼠的体重并观察小鼠的粪便性状。当发现阳性组小鼠体重减轻和粪便带血(便血)等结直肠炎症状时,则表明炎症性肠病模型构建成功。采用二氧化碳过量吸入法处死三组小鼠,分别取三组小鼠的结直肠黏膜组织以及脾脏组织,留待进一步检测。2.苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining,HE)和免疫组织化学法(immunohistochemistry,IHC)分别运用HE和IHC观察三组小鼠的结直肠黏膜以及脾脏组织的结构和检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)在三组小鼠的结直肠黏膜组织中的表达水平。3.检测SUMO1、Wnt5a、β-catenin以及相关炎症因子在结直肠黏膜组织和脾脏组织中的表达应用实时定量聚合酶链式反应技术(Polymerase Chain Reaction,PCR)、Western-blot以及IHC等方法检测三组小鼠结直肠黏膜组织和脾脏组织中SUMO1、Wnt5a、β-catenin以及其相关炎症因子的表达。4.检测炎症性肠病及结直肠癌患者肠道组织中SUMO1及β-catenin等的表达采用免疫组织化学法检测患有炎症性肠病及结直肠癌的患者和正常人结直肠组织中SUMO1及β-catenin等的表达。结果1.构建白藜芦醇修复小鼠炎症性肠病模型实验结果表明,从建模的第7天开始,模型组小鼠的体重持续下降,阴性对照组小鼠的体重则稳步增加,而实验组小鼠的体重则稳定维持在一定的水平并略有上升。当观察到模型组小鼠有明显便血现象,实验组小鼠便血现象与模型组相比便血程度较轻且便血时间较晚,显示白藜芦醇修复小鼠炎症性肠病模型构建成功。模型组小鼠的疾病活动指数(Disease activity index,DAI)指数从第7天开始持续大幅度上升,实验组小鼠的DAI从第7天开始小幅度上升后就维持在一定的水平不变,而阴性对照组小鼠的DAI持续为0。二氧化碳过量吸入法处死三组小鼠,取各组小鼠的结直肠黏膜组织以及脾脏组织,观察发现实验组小鼠结直肠的长度明显长于模型组小鼠的结直肠;HE染色发现与模型组小鼠相比,实验组小鼠的结直肠黏膜以及脾脏组织结构明显整齐,浸润的炎症细胞明显减少;IHC结果表明PCNA在实验组小鼠结直肠黏膜组织中的表达水平明显高于模型组小鼠。2.检测SUMO1、Wnt5a、β-catenin以及相关炎症因子在结直肠黏膜组织和脾脏组织中的表达利用已构建好的白藜芦醇修复小鼠炎症性肠病模型,通过实时定量PCR、Western-blot以及免疫组织化学等方法,检测SUMO1、Wnt5a、β-catenin与相关炎症因子在阴性对照组、模型组以及实验组小鼠结直肠黏膜组织和脾脏组织中的表达水平。实时定量PCR实验结果显示,实验组小鼠结直肠黏膜组织和脾脏组织中的SUMO1、IL-6、IL-8、TNF-a与IL-1β的表达水平与模型组相比显著降低,实验组小鼠结直肠黏膜组织中IL-10与SENP1的表达水平明显高于模型组;在实验组小鼠脾脏组织中IL-10与SENP1的表达水平明显高于模型组。Western-blot实验结果表明,实验组小鼠结直肠黏膜组织中的SUMO1、Wnt5a、β-catenin和NF-κB等的表达水平与模型组相比显著降低。3.检测炎症性肠病及结直肠癌患者结直肠病变组织中SUMO1及β-catenin等的表达采用IHC检测炎症性肠病及结直肠癌患者结直肠黏膜组织和健康对照组结直肠黏膜组织中SUMO1与β-catenin的表达水平,结果显示,炎症性肠病及结直肠癌患者患者结直肠黏膜组织中SUMO1与β-catenin的表达水平明显高于正常对照组。结论本研究成功建立了白藜芦醇修复小鼠炎症性肠病的模型,经检测,实验组小鼠的结直肠黏膜组织和脾脏组织中SUMO1的表达水平明显低于模型组小鼠,并伴有炎症因子的表达水平的降低和Wnt/β-catenin以及NF-κB信号通路活化程度的降低。炎症性肠病及结直肠癌患者的肠道病变组织中SUMO1的表达明显高于正常对照组,提示SUMO1具有促进炎症性肠病以及结直肠癌的作用。上述研究结果显示SUMO1在白藜芦醇修复小鼠炎症性肠病过程中具有重要作用,由此可见,白藜芦醇可能是通过下调SUMO1的表达来修复炎症性肠病。本研究为临床应用白藜芦醇治疗炎症性肠病提供了理论基础和实验依据。
【学位授予单位】：江苏大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5
【图文】：

构建白藜芦醇修复IBD小鼠模型

图1.1 构建白藜芦醇修复IBD小鼠模型stablishment of a model of resveratrol in repairing inflamdisease in mice1在白藜芦醇修复IBD模型小鼠结直肠黏膜与脾脏组织

其相关信号通路分子在炎症性肠病及结直肠组织中的表达pression of SUMO1 and its related signaling p of patients with inflammatory bowel disease a修复 DSS 诱导的小鼠炎症性肠病的作用及症性肠病提供新的理论基础和实验依据。炎症相关性疾病以及一些肿瘤的病程，但是尚未见报道，因此，本课题深入研究 SUM用及其机制，具有较高的科学研究价值和

【参考文献】

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本文编号：2749209