清下活血方对重症急性胰腺炎大鼠肠粘膜屏障保护作用的机制研究
发布时间：2020-07-11 05:01
【摘要】：目的:通过建立重症急性胰腺炎(S A P)大鼠模型,研究S A P大鼠小肠上皮细胞促炎抗炎细胞因子I L-6、I L-1 0及粘蛋白M U C 2不同时间点的动态变化,并给予清下活血方制剂进行干预治疗,以探讨清下活血方对S A P大鼠肠粘膜屏障损伤的保护作用及相关机制,为临床治疗重症急性胰腺炎提供实验依据。材料与方法:(1)SD大鼠随机分成假手术组(空白组,n=12)、SAP组(模型组,n=24)、清下活血组(治疗组,n=2 4),每组分2 4 h、4 8 h、7 2 h三个时间点。(2)空白组仅开腹,翻动胰腺、十二指肠肠曲等脏器后关腹。S A P组采用5%牛磺胆酸钠(0.1 m L/1 0 0 g)胰胆管逆行注射制备S A P大鼠模型。治疗组在造模2 h后予清下活血方溶液灌胃(1 m L/1 0 0 g),每1 2 h一次,连续给药。(3)三组大鼠分别于术后2 4、4 8、7 2 h三个时间点麻醉后进行取材,腹主动脉采集血液,分别摘取大鼠胰腺及小肠组织进行检测。检测各组大鼠血清淀粉酶水平,观察大鼠胰腺和肠粘膜的病理学变化,分别按照S c h m i d t标准及C h i u氏评分法评价胰腺及肠粘膜损伤程度,荧光定量法(R t-P C R)检测小肠上皮细胞中I L-6 m R N A、I L-1 0 m R N A的表达,免疫组化法检测小肠上皮细胞中M U C 2的表达。采用S P S S 1 7.0统计软件进行统计分析。结果:1.造模时可见胰腺组织明显肿胀充血,提示造模成功。2.模型组血清淀粉酶水平在2 4、4 8、7 2 h三个时间点均明显高于空白组(P0.0 1);治疗组三个时间点血清淀粉酶的水平高于空白组(P0.0 1),与模型组各时间点比较有所降低,比较有统计学差异(P0.0 5)。3.模型组和治疗组的胰腺病理学评分在2 4、4 8、7 2 h均高于空白组(P0.0 1),治疗组各时间点胰腺病理学评分低于模型组,比较有统计学差异(P0.0 5)。4.模型组和治疗组在2 4、4 8、7 2 h三个时间点小肠组织的病理评分均高于空白组(P㩳0.0 1);治疗组三个时间点病理评分低于模型组,比较有统计学差异(P0.0 5)。5.模型组各时间点I L-6 m R N A的水平较空白组明显增高(P0.0 5),且增高程度与时间成正比,但无统计学意义;与模型组比较,治疗组各时间点I L-6 m R N A的水平低于模型组,差异具有统计学意义(P0.0 5)。与空白组比较,模型组各时间点I L-1 0 m R N A的水平显著增高(P0.0 1),且增高程度与时间成反比(P0.0 5);与模型组比较,治疗组各时间点I L-1 0 m R N A的水平显著增高(P0.0 5或P0.0 1),以4 8、7 2 h两时间点最为明显。6.与空白组比较,模型组各时间点的M U C 2染色评分明显降低(P0.0 1);治疗组与模型组比较,各时间点M U C 2染色评分有所增高,具有统计学差异(P0.0 5)。结论:1.清下活血方可降低S A P大鼠血清淀粉酶水平及胰腺组织形态学评分,对急性胰腺炎具有治疗作用。2.清下活血方可降低S A P大鼠小肠上皮细胞促炎性细胞因子I L-6水平,提高抗炎性细胞因子I L-1 0水平,重建促炎和抗炎细胞因子之间的平衡,减轻肠道组织损伤。3.清下活血方能有效保护S A P大鼠肠上皮细胞,增加M U C 2分泌量,从而修复肠粘膜层,对S A P引起的肠粘膜屏障损伤具有保护作用。
【学位授予单位】：辽宁中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5
【图文】：
R :C TG GA TG GC TA CG TA CA TG G2. 5 . 3. 5 荧光 定 量 融解 曲 线 图4 ： I L- 6溶 解 曲线 图 图5 ：I L- 10 溶 解 曲线 图 P CR 循环 （ ×4 0 循环 ） 9 5℃ 2 mi n9 5℃ 3 0s 6 0℃ 3 0s
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辽宁 中 医 药大 学 20 17 届硕 士 学位 论 文 - 15 图6 ： β - ac ti n溶 解曲 线 图 2. 5 .3 .7 结 果分 析 根据 下列 公 式计 算 各 基 因的 起 始 模 板浓 度 ， 结 果均 表 示为 目的 基 因 与 β- a c t in 基因 含量 的 相 对比 值 。 △C t =C t Ta r ge t -C t Re f △△ C t= C t Sa m pl e -C t Co n tr o l 目的 基 因的 相对 含 量＝ ２ －△ △G t 2. 5 .4 免 疫组 化 法 检测 小 肠上 皮 细 胞中 M UC 2 的表 达 2. 5 .4 . 1 免疫 组 化步 骤 1） 组 织 脱水 ， 透 明， 浸 蜡 ， 包埋 、 切 片， 及 对 切 片脱 蜡 、 复水 。 步 骤同 上 。 2） 抗 原 微 波修 复 ： 枸 橼酸 盐 缓 冲 液微 波 修 复（ 中 低火 ）1 0 mi n， 室 温逐 渐冷 却 至 常 温， 再 重 复一 次
【学位授予单位】：辽宁中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5
【图文】：
R :C TG GA TG GC TA CG TA CA TG G2. 5 . 3. 5 荧光 定 量 融解 曲 线 图4 ： I L- 6溶 解 曲线 图 图5 ：I L- 10 溶 解 曲线 图 P CR 循环 （ ×4 0 循环 ） 9 5℃ 2 mi n9 5℃ 3 0s 6 0℃ 3 0s
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辽宁 中 医 药大 学 20 17 届硕 士 学位 论 文 - 15 图6 ： β - ac ti n溶 解曲 线 图 2. 5 .3 .7 结 果分 析 根据 下列 公 式计 算 各 基 因的 起 始 模 板浓 度 ， 结 果均 表 示为 目的 基 因 与 β- a c t in 基因 含量 的 相 对比 值 。 △C t =C t Ta r ge t -C t Re f △△ C t= C t Sa m pl e -C t Co n tr o l 目的 基 因的 相对 含 量＝ ２ －△ △G t 2. 5 .4 免 疫组 化 法 检测 小 肠上 皮 细 胞中 M UC 2 的表 达 2. 5 .4 . 1 免疫 组 化步 骤 1） 组 织 脱水 ， 透 明， 浸 蜡 ， 包埋 、 切 片， 及 对 切 片脱 蜡 、 复水 。 步 骤同 上 。 2） 抗 原 微 波修 复 ： 枸 橼酸 盐 缓 冲 液微 波 修 复（ 中 低火 ）1 0 mi n， 室 温逐 渐冷 却 至 常 温， 再 重 复一 次
【参考文献】
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1 钦丹萍;魏霞;方国栋;杨锋;赖登攀;;全程应用大承气汤加味方对重症急性胰腺炎模型大鼠肠黏膜屏障的影响[J];中国中西医结合杂志;2015年12期
2 朱惠萍;朱雄雄;张川;;清胰汤对急性胰腺炎患者黏膜屏障功能的影响[J];四川中医;2015年12期
3 贺东黎;;大承气汤防治急性胰腺炎内毒素血症的临床研究[J];中药药理与临床;2015年06期
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6 陈军贤;陈明显;夏亮;傅睿;陆拯;;“通导解毒法”治疗急性胰腺炎的临床应用[J];中华中医药学刊;2015年06期
7 崔e
本文编号：2749992
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/zhongyaolw/2749992.html
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