基于复方健耳剂拆方的补气药干预庆大霉素耳毒性聋实验研究

发布时间：2020-07-11 06:13

【摘要】：目的:在中医健脾益气理论指导下,利用听觉脑干诱发电位(ABR)技术、耳蜗铺片技术、RT-PCR(Real-time Polymerase Chain Reaction)技术,观察复方健耳剂拆方之补气药干预庆大霉素耳毒性聋的听功能、耳蜗毛细胞影响作用,并通过对耳蜗超氧化物歧化酶1(Superoxide Dismutase 1,SOD1)的检测,探讨基于活性氧介导的庆大霉素耳蜗毛细胞损害的病理机制,以及中药保护作用药理机制。通过对血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)和肌酐(creatine,Cr)的检测、肾组织切片,观察中药对肾功能和肾组织的保护作用,探讨护肾与护耳的关系,以及中医脾为后天之本与肾为先天之本,“肾开窍于耳”等理论的科学根据。方法:选择正常健康豚鼠54只,随机分成正常对照组、庆大霉素(Gentamicin,GM)对照组、中药+GM对照组各18只。正常对照组,不作任何药物处理,常规饲养至11天。GM对照组,按照200mg/kg/d剂量,每天注射2次,连续9天后停药,第11天终止饲养。中药+GM对照组预先连续服用复方健耳剂拆方11号10天,按照3.994g(kg/d)剂量,然后在继续服用中药同时开始注射GM,GM用量和方法同GM对照组,连续9天同时停药,第11天终止饲养。每组取6只动物行ABR测试,了解听力状况。6只动物分别取心脏血液用于血清BUN、Cr检测,了解肾功能;取肾脏用于肾组织切片染色,了解肾组织形态学;取耳蜗用于耳蜗铺片,了解耳蜗毛细胞形态学并计数毛细胞。另6只动物耳蜗通过RT-PCR测定SOD1,提供基于活性氧途径分析依据。所得数据最后经统计学处理。结果:第9天中药+GM对照组的ABR阈值与GM对照组比较,差异存在显著性意义(P0.05),与正常对照组比较,差异有统计学意义(P0.05)。第11天耳蜗铺片显示,正常对照组内、外毛细胞排列整齐,无细胞缺损;GM对照组外毛细胞破坏严重,呈片状崩解,残缺不全,但内毛细胞基本未受影响;中药+GM组外毛细胞破坏较轻,呈散在崩解缺失,内毛细胞未受影响。GM对照组与其他两组比较,差异均有显著性意义(P0.05)。中药+GM组与正常对照组比较,差异有显著性意义(P0.05)。第11天肾切片显示,正常对照组肾组织细胞形态与结构正常,GM对照组肾组织细胞与结构受损严重,而中药+GM组肾组织细胞与结构受损较轻,基本保护较好。GM对照组BUN、Cr两项指标均高于其他两组,经统计学比较,差异均有显著性意义(P0.05),而中药+GM组与正常对照组比较,差异则无显著性意义(P0.05)。第11天中药+GM组耳蜗SOD1表达均高于其他两组,经统计学比较,差异均有显著性意义(P0.05)。结论:豚鼠GM200mg/天造模成功。GM对耳蜗破坏主要影响外毛细胞,且底回破坏较顶回严重。GM对耳蜗外毛细胞和听力损害以及肾脏和肾功能都有损害。复方健耳剂拆方补气类中药具有明显同时保护豚鼠GM致耳蜗外毛细胞和听功能损害以及肾脏和肾功能损害的作用。中药药效作用与其通过对机体SOD系统激活,清除氧自由基,从而阻止活性氧介导细胞凋亡通路有关。中药护肾作用,是其拮抗GM耳毒性损害的中药机制之一。中医“肾开窍于耳”理论具有一定科学依据。
【学位授予单位】：广西中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5
【图文】：

顶回,外毛细胞,情况,单因素方差分析

1.A1、A2、A3 分别表示正常对照组豚鼠耳蜗的底回、中回、顶回外毛细胞情况（X400）B1、B2、B3 分别表示 GM 组对照豚鼠耳蜗的底回、中回、顶回外毛细胞情况（X400）C1、C2、C3 分别表示中药+GM 组对照豚鼠耳蜗的底回、中回、顶回外毛细胞情况（X43.2 统计学方法采用 SPSS22.0 软件进行统计分析。计量资料以 X ±S 表示，3 组间采用单因素方差分析，两组之间比较用 LSD-t 分析。P<0.05 为差异计学意义。3.3 毛细胞计数统计结果从 GM 对照组、中药+GM 对照组、正常对照组中各选 6 耳，制成蜗完整铺片，计算全耳蜗外毛细胞在固定视野中的计数。其中正常组毛细胞计数远远高于其他两组，单因素方差分析组间比较，P=0.

【参考文献】