照山白化学成分研究及初步的药理活性筛选

发布时间：2020-07-13 01:06

【摘要】：照山白(Rhododendron micranthum),为杜鹃花科、杜鹃花属植物,别名照白杜鹃、小花杜鹃。分布于中国东北、华北及西北地区,朝鲜也有分布。照山白以枝叶入药,是中药大辞典收载的常用有毒药用植物。在镇痛方面有着悠久的药用历史,主要用于治疗慢型气管炎、风湿痹痛、腰痛、痛经、产后关节痛、痢疾、骨折等。近年来国内外学者对该科多种植物进行了化学成分和药理活性研究,其成分具有丰富的结构多样性,主要包括木藜芦烷型及其相关二萜,还含有黄酮,三萜,酚类及挥发油等多种物质。为了进一步研究照山白的化学成分及其生物活性,本课题对照山白的乙酸乙酯萃取部位进行了系统的分离纯化,对分离得到的单体化合物进行结构鉴定和活性研究。目的:本课题以照山白枝叶为研究对象,采用反复硅胶柱色谱、中压反相柱色谱、凝胶Sephadex LH-20柱色谱和制备HPLC等多种色谱技术相结合的方法对其化学成分进行系统的分离纯化,对分离得到的单体化合物用现代波谱技术(UV、IR、MS、1D-NMR、2D-NMR、CD等)进行结构鉴定。对分离得到的二萜类化合物进行镇痛活性筛选,以期获得结构新颖的镇痛活性化合物。方法:干燥的照山白枝叶110 kg粉碎后,用95%乙醇回流提取三次,提取物减压回收得浸膏12 kg,将浸膏用水分散得混悬液,依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取,萃取液浓缩后分别得到石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇四个极性部位。采用大孔树脂柱色谱、硅胶柱色谱、中压反相柱色谱、凝胶Sephadex LH-20柱色谱和制备高效液相色谱法对乙酸乙酯部位的化学成分进行分离纯化,利用示差折光检测器对二萜进行快速识别和分离,借助紫外检测器和蒸发光散射检测器对分离得到的化合物进行纯度分析,采用UV、IR、HRMS、~1H-NMR、~(13)C-NMR、DEPT、~1H-~1H COSY、HMQC、HMBC、NOESY、CD等波谱学方法对单体化合物进行结构鉴定。对分离得到的二萜类化合物通过醋酸扭体实验测定其镇痛活性。结果:通过对照山白乙酸乙酯部位的系统分离,共得到51个化合物。包括18个二萜类化合物(1*-3*,4-18),12个木脂素类化合物(19-30),4个倍半萜类化合物(31-34),13个酚类化合物(35-47),以及4个其他类化合物(48-51)。鉴定结果如下:6-deoxy-grayanotoxin XVIII 3-O-β-D-glucoside(1*),6-deoxy-1-epi-graynotoxin XVIII 3-O-β-D-glucoside(2*),grayanotoxin XVIII 6-O-β-D-glucoside(3*),grayanotoxin I(4),grayanotoxin III(5),grayanotoxin II(6),grayan otoxin IV(7),grayanotoxin VII(8),grayanotoxin IX(9),grayanotoxin VIII(10),grayanotoxin XVIII(11),pierisformosin A(12),6-deoxy-1-epigrayanotoxin XVII(13),kalmanol(14),grayanoside B(15),pierisformos ide B(16),pierisformoside F(17),pieroside B(18),(7S,8S)-4-hydroxy-9'-O-(α-L-rhamnopyranosyl)-3,3',5,-trimethoxy-8-O-4'-neoligan(19),icariside E1(erythro)(20),icariside E2(threo)(21),(2S,3R)-2,3-dihydro-3-hydroxy methyl-7-methoxy-2-(4'-hydroxy-3'-methoxyphenyl)-5-benzofuranpr-opanol3a-O-α-L-rhamnopy-ranoside(22),(8R,7'S,8'S)-5,5'-dimethoxy-7-oxolaricir esinol 9'-O-β-D-xylopyranoside(23),schizandriside(24),(-)-lyoniresinol3α-O-β-D-xylopyranosi-de(25),(-)-secoisolariciresinol-O-α-L-rhamnopyranosi de(26),ssioriside(27),(-)-secoisolariciresinol-9-O-β-D-xylopyranoside(28),prupaside(29),alutaceuol(30),3β-[(-β-D-glucpyrnosyl)o-xy]eudesma-4(14).11(13)-dien-12-ol(31),zedoarolide B(32),10,11-dihydro-10,11-dihyd roxynerolidol(33),schensianol A(34),esculetin(35),sco-polin(36),2-[4-(3-Hydroxyproxypropyl)-2-methoxphenoxy]propane-1,3-di-ol(37),threo-3-(4-hydroxy-3,5-dimethoxyphenyl)-3-ethoxypropane-1,2-diol-(38),3-(4-hyd roxy-3,5-dimethoxyphenyl)propane-1,2-diol(39),pisoninol(40),2-phenyl ethyl-β-D-glucopyranoside(41),4-O-β-D-glucopyranosyl-2-O-methylphloroa cetophenone(42),4-ally-2,6-dimethoxyphenyl 1-O-β-D-apiofuranosyl-(1''-6')-O-β-D-glucopyranoside(43),eugeny l-O-β-D-apiofuranosyl-(1''-6')-O-β-D-g lucopyranoside(44),4-allyl-2,6-dimethoxyphenolglucoside(45),benzyl2-h ydroxy-4-O-β-D-glucopyranosyl-benzoate(46),amarusine A(47),9ξ-O-β-D-glucopyranosyloxy-5-megastigmen-4-one(48),(-)-3-oxo-α-ionyl-O-β-D-glu copyranoside(49),(Z)-3-Hexenylβ-D-glucopyranoside(50),oct-1-en-3-ylβ-glucopyranoside(51)。对化合物1、2、4-18进行了小鼠醋酸扭体实验,在10 mg/kg剂量下化合物1,12有较强的镇痛活性(*P0.05),化合物6-11、13、14则出现明显的毒副作用。降低剂量为1.0 mg/kg后,化合物6、7、8、10、11、13的镇痛抑制率分别能达到54.3%、42.9%、27.1%、12.1%、30.0%、38.6%,化合物9,14仍有明显的毒副作用。再降低剂量为0.1 mg/kg后,化合物9,14的镇痛抑制率分别能达到44.3%,42.9%。在0.1 mg/kg剂量下,化合物5的镇痛抑制率为70%,化合物4表现出显著的镇痛活性,镇痛抑制率为96.4%(**P0.01),而相同剂量下吗啡的镇痛抑制率为63.3%。结论:本研究通过合理利用各种分离手段,对照山白乙酸乙酯萃取部位进行了系统分离,共鉴定了51个化合物的结构。包括18个二萜类化合物,12个木脂素类化合物,4个倍半萜类化合物,13个酚类化合物,4个其他类化合物。其中新化合物3个(1*-3*)。从该属首次分离得到的化合物有27个,分别为:12,16,17,19-24,26,28,29,31-34,37-40,43-49;从该植物中首次分离得到的化合物有5个,分别为:15,18,25,27,30。从照山白中分离得到的3个新二萜类化合物均为二萜葡萄糖苷,没有发现新的二萜苷元。其中化合物3是首次发现的葡萄糖连在6位羟基上的木藜芦烷型二萜苷。对分离得到的二萜类化合物进行醋酸扭体实验,根据镇痛活性的结果,初步总结了木藜芦烷型二萜镇痛活性的构效关系,即(1)二萜苷的活性比苷元弱,毒性也较低;(2)3β-OH,5β-OH,10β-CH3为必须基团;(3)10,20位双键取代活性降低;(4)1α-OH比1β-OH活性好;(5)14位OAc取代较OH取代活性好;(6)15,16位成双键,对活性没有影响。
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R284;R285
【图文】：

照山白化学成分研究及初步的药理活性筛选

化合物1的核磁共振氢谱

照山白化学成分研究及初步的药理活性筛选

化合物1的核磁共振碳谱

照山白化学成分研究及初步的药理活性筛选

化合物1的异核单量子相关谱

【参考文献】