十味调脂方对非酒精性脂肪性肝病大鼠MMP-2mRNA、TIMP-2mRNA表达的影响

发布时间：2020-07-13 06:04

【摘要】：目的:本实验应用高脂饲料诱导大鼠非酒精性脂肪性肝病(Nonalco hol-ic fatty liver disease,NAFLD)模型,随机分组后分别予中药“十味调脂方”进行实验,西药辛伐他汀做对照。治疗后取标本观察肝脏组织学变化;测定血清中甘油三酯(triglycerides,TG)、总胆固醇(total cholest erol,TC)、丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(asPartate aminotransferase,AST)水平的变化;测定肝组织TG、TC的含量;运用RT-PCR技术检测大鼠肝组织基质金属蛋白酶-2mRNA(MMP-2mRNA)、基质金属蛋白酶抑制因子-2mRNA(TIMP-2mRNA)的表达情况,从而探讨十味调脂方对NAFLD大鼠体内TG、TC的影响及对MMP-2mRNA与TIMP-2mRNA表达的影响,探讨十味调脂方对N AFLD大鼠的作用效果及可能机制,以期为中医药防治NAFLD提供实验依据。方法:健康、清洁级Wistar雄性大鼠40只,体重250-280g,予普食适应性喂养7天,观察大鼠一般情况,体质健康者用于实验。将40只大鼠随机分为4组,正常组(N)、模型组(M)、十味调脂组(Z)、辛伐他汀组(X),每组各10只。其中除正常组予普通饲料外,其余3组均予高脂饲料,8周后,分别从各高脂饲料喂养组的大鼠中随机选取1只大鼠处死,取其肝组织进行病理学检查,以检测高脂饲料诱导的NAFLD模型是否成功。确定造模成功后第二天开始予各治疗组灌胃给药,正常组与模型组予生理盐水灌胃作对照。治疗4周后处死各组大鼠,留取肝脏组织和血清标本。用HE染色观察大鼠肝脏组织的病理形态变化;采用2,4-二硝基苯肼法(比色法)测定血清TG、TC、ALT、AST的含量,应用色谱-可见分光光度法检测肝组织中TG和TC的含量。运用RT-PCR技术检测大鼠肝脏中MMP-2、TIMP-2mRNA的表达水平。结果:1大鼠肝脏病理学结果:正常组大鼠肝小叶结构清晰,中央静脉周围肝细胞呈辐射形式排列,形态一致整齐,肝细胞结构正常,大小均匀,细胞核正常,位于中央,胞质丰富;未见明显炎症细胞浸润及脂肪变性、坏死。模型组大鼠肝小叶病变严重,偶可见炎性细胞浸润,肝小叶形态受损,构造不清楚,细胞索排列无规律,肝细胞水肿,胞浆内脂肪空泡挤压核圆,肝组织呈弥漫性脂肪变。余各治疗组大鼠肝细胞脂肪性变均有不同程度好转的趋势。2各组大鼠血清和肝组织各指标含量比较与正常组相比较,模型组大鼠血清tg、tc、alt、ast和肝组织tg、tc含量显著升高,差异具有统计学意义(p0.05);与模型组相比较,西药组和中药组大鼠血清tg、tc、alt、ast及肝组织tg、tc含量明显下降,差异具有统计学意义(p0.05);与中药组相比,西药组大鼠血清tg、tc含量显著下降,差异有统计学意义(p0.05);相比于西药组大鼠中药组大鼠肝组织中tg、tc含量显著下降,差异有统计学意义(p0.05);两组血清alt、ast差异无统计学差异(p0.05)。3各组大鼠肝脏mmp-2mrna、timp-2mrna表达水平各组大鼠mmp-2mrna表达无统计学差异。与正常组相比模型组timp-2mrna呈高表达状态,差异有统计学意义(p0.05);mmp-2/timp-2比值降低,差异有统计学意义(p0.05);模型组与中药组相比timp-2mrna表达降低,差异无统计学意义(p0.05);中药组mmp-2/timp-2比值较模型组比值显著升高,差异有统计学意义(p0.05)。与模型组比较,西药组大鼠timp-2mrna表达明显升高,差异具有统计学意义(p0.05);而mmp-2/timp-2比值差异无统计学意义(p0.05)。与中药组相比较,西药组timp-2mrna水平升高,差异有统计学意义(p0.05);mmp-2/timp-2比值中药组较西药组显著升高,差异有统计学意义(p0.05)。结论:1nafld模型大鼠血清中tg、tc、alt、ast以及肝组织中tg、tc含量较正常组明显升高,可能是引起大鼠肝细胞脂肪性改变、炎性细胞浸润、肝细胞纤维化改变等病理变化的重要因素。2nafld模型大鼠肝脏中mmp-2/timp-2比值的变化,是脂质沉积肝细胞引起肝细胞炎性改变、纤维化等严重并发症的重要发病机制之一。3十味调脂方可能是通过降低NAFLD模型大鼠体内血脂的含量,上调MMP-2/TIMP-2比值,从而缓解肝脏脂质变性加速胶原的降解,减轻细胞外基质(ECM)的沉积,达到缓解肝脏纤维化的病变过程,为中医药防治NAFLD提供实验依据。
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5
【图文】：

图 1 不同组血清 TG,TC 比较Fig.1 Comparison of serum TG,TC in different groups图 2 不同组血清 ALT,AST 比较

不同组血清ALT,AST比较

十味调脂方对非酒精性脂肪性肝病大鼠MMP-2mRNA、TIMP-2mRNA表达的影响

不同组肝TG,TC比较

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