甘草内生菌与宿主不同提取物化痰止咳作用比较研究

发布时间：2020-07-13 19:26

【摘要】：目的通过对甘肃野生与栽培乌拉尔甘草内生菌代谢产物以及甘草水煎液、总皂苷、总黄酮化痰和止咳作用的比较研究,观察甘草内生菌代谢产物与甘草水煎液、总皂苷、总黄酮止咳化痰作用的差异,探讨甘草内生菌代谢产物与宿主在止咳化痰方面是否具有相同的药理活性,为发现甘草药用资源提供新思路。方法1.采用超声提取法分别从野生、栽培甘草中提取总黄酮和总皂苷,紫外分光光度计检测其含量;再利用萃取法分别从野生、栽培甘草提取液中分离出粗总黄酮和粗总皂苷,紫外分光光度计检测其纯度。2.采用小鼠气管酚红排泌量法,以酚红排泌量测定甘草内生菌代谢产物及甘草水煎液、总黄酮、总皂苷的排痰量。采用建立痰浊阻肺大鼠模型,以大鼠一般情况变化、肺功能、肺组织病理变化、炎性因子TNF-α、COX-2、IL-17、IL-23等为指标,观察甘草内生菌代谢产物与甘草水煎液、总皂苷、总黄酮对痰浊阻肺型大鼠的干预和化痰作用的差异。3.采用小鼠氨水引咳法和大鼠机械刺激引咳法,以小鼠半数引咳时间(ET50)、R值和大鼠90 min内咳嗽次数等为指标,观察甘草内生菌代谢产物与甘草水煎液、总皂苷、总黄酮止咳作用的差异。4.采用BLAST同源性比较法并构建系统发育树对具有止咳或化痰作用的甘草内生菌进行鉴定。结果1.检测结果表明,野生甘草总皂苷含量为5.23mg·g-1,总黄酮含量为16.28mg·g-1;栽培甘草总皂苷含量为3.20mg·g-1,总黄酮含量为6.81mg·g-1。野生甘草粗总皂苷含量434.64mg·g-1,纯度为43.36%,粗总黄酮含量750.48mg·g-1,纯度为75.05%;栽培甘草粗总皂苷含量445.88mg·g-1,纯度为45.59%,粗总黄酮718.45mg·g-1,纯度为71.85%。2.化痰实验表明,JTYB029、JTZB005、JTZB006、JTZB058、JTZB060、JTZB063均能增加正常小鼠气管酚红排泌量(P0.05或0.01),化痰作用与甘草水煎液、总黄酮、总皂苷组相当。痰浊阻肺实验结果显示,与模型组比较,JTYB029、JTZB005、JTZB006、JTZB058、JTZB063组大鼠的肺功能检测各项指标均有所上升,TNF-α、COX-2、IL-17、IL-23含量均降低(P0.05或P0.01),且对痰浊阻肺型大鼠的干预作用相当于宿主甘草水煎液、总黄酮、总皂苷。JTYB029、JTZB005、JTZB006、JTZB058、JTZB063组大鼠肺组织可见支气管上皮较模型组完整,纤毛增多,支气管管壁略有增厚,粘膜下炎细胞浸润较模型组有所改善,肺泡腔轻度扩大,肺间质炎细胞浸润减轻。3.止咳实验表明,甘草内生菌JTYB029、JTZB005、JTZB006、JTZB043、JTZB060、JTZB063均能抑制机械刺激大鼠的90min内咳嗽次数,具有止咳作用(P0.01或P0.05),且止咳作用与甘草水煎液、总皂苷、总黄酮作用相似。各内生菌组均能延长氨水引咳小鼠ET50,JTZB005、JTZB006、JTZB014、JTZB020、JTZB043、JTZB060、JTZB063具有显著作用(R150%),JTYB006、JTZB058有一定作用(R130%)。4.JTYB029、JTZB005、JTZB006、JTZB043、JYZB058、JTZB060、JTZB063均为Bacteria;Firmicutes;Bacilli;Bacillales;Bacillaceae;Bacillus,即甘草内生细菌;厚壁菌门;芽孢杆菌纲;芽孢杆菌目;芽孢杆菌科;芽孢杆菌属。结论1.JTYB029、JTZB005、JTZB006、JTZB058、JTZB063等5株甘草内生菌具有与宿主相同的化痰药理活性,且对痰浊阻肺型大鼠肺功能和肺组织具有较好的改善作用。2.JTYB029、JTZB005、JTZB006、JTZB043、JTZB060、JTZB063等6株甘草内生菌具有与宿主相同的止咳药理活性,且在一定环境下止咳作用优于或等同于其宿主水煎液、或总皂苷、或总黄酮。3.综合本次实验结果,TYB029、JTZB005、JTZB006、JTZB063等4株甘草内生菌与其宿主甘草具有相同的止咳和化痰药理活性,提示在止咳化痰作用方面,JTYB029可替代野生甘草,JTZB005、JTZB006、JTZB063可替代栽培甘草。4.具有止咳或化痰作用的7株甘草内生菌(JTYB029、JTZB005、JTZB006、JTZB043、JTZB058、JTZB060、JTZB063)均为芽孢杆菌属。
【学位授予单位】：甘肃中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R284;R285.5
【图文】：

甘草内生菌与宿主不同提取物化痰止咳作用研究考察曲线苷对照品溶液 0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7 mL，分甲醇溶剂将体积补至 3.0 mL，摇匀，再加 10% NaOH%甲醇溶液定容，以 70%甲醇溶液为空白，在 410 nm量（mg）为横坐标 X，以吸光度 OD 值为纵坐标 Y 绘mg）与吸光度之间的回归方程为： Y=1.2071X+0.014181mg 线性关系良好。见图 1。

图 1 甘草苷标准曲线曲线对照品溶液 0.1、0.15、0.2、0.25、0.3、0.35mL 于干燥密加入 5%香草醛-冰醋酸溶液0.25 mL，摇匀，再加入高氯浴中反应 20 min，取出立即冰水浴冷却至室温，用 70%长处测定其 OD 值，并以甘草酸铵质量（mg）为横坐标 绘制标准曲线[7]，得到甘草酸铵质量（mg）与吸光度之.0427，r=0.9987，甘草酸铵在 0.0631～0.2209mg 线性关

甘草内生菌与宿主不同提取物化痰止咳作用研究 548 nm。红标准溶液4.2”下配制好的标准溶液在紫外分光光度计上于 548 nm 处测定液为空白，每个样品重复测定 3 次求平均值。以酚红浓度 X（μ度 Y 为纵坐标建立回归方程 Y=0.4X+0.0631（r=0.99945），酚红内线性关系良好。结果见图 3。

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本文编号：2753875