丹参酮ⅡA及其衍生物YZD-27对脑缺血的保护作用研究

发布时间：2020-07-14 00:24

【摘要】：目的:随着全球人口老龄化的发展,脑卒中,已成为世界范围内的主要健康问题。中枢神经系统中常驻的免疫细胞之一为小胶质细胞。正常情况下,小胶质细胞能持续监测大脑的微环境,会对细胞外信号进行反应,并通过吞噬作用清除细胞碎片和有毒子细胞,从而保持正常的细胞内平衡。在缺血性脑卒中的情况下,小胶质细胞从静息状态迅速转化为活跃的“阿米巴样”状态,当它被激活时,小胶质细胞通常会极化为经典激活促炎M1型(classically actived microglia)和选择性激活抗炎M2型(alternatively actived microglia)。鉴于小胶质细胞激活在脑缺血后脑组织损伤中起到双向作用,促进小胶质细胞向M2型具有神经保护作用的极化,研发治疗脑缺血的药物具有重要意义。丹参酮ⅡA是丹参中重要的有效活性成分,具有天然抗氧化、扩张血管、清除自由基、抗炎和对神经细胞保护等药理作用,但是由于丹参酮ⅡA的溶解性较差,故对丹参酮ⅡA结构进行改造得到衍生物YZD-27。本课题组对丹参酮ⅡA及其衍生物YZD-27脑缺血保护作用进行研究。并从丹参酮ⅡA及其衍生物YZD-27对小胶质细胞激活和极化的调控作用角度探讨其作用机制,为脑缺血的预防和治疗提供新的探索思路。方法:采用大脑中动脉栓塞法(middle cerebral artery occlusion,MCAO)线栓法制备脑缺血模型。大鼠随机分为9组:假手术组,模型组(MCAO),丹参酮ⅡA及YZD-27低剂量给药组(1mg/kg),丹参酮ⅡA及YZD-27中剂量给药组(3mg/kg)、丹参酮ⅡA及YZD-27高剂量给药组(9mg/kg),丁苯酞给药组(10mg/kg),各给药组于缺血后5min及再灌注时两次尾静脉注射给药。脑缺血2h再灌注24h后,对各组的大鼠进行神经行为学评分,TTC染色测定脑梗塞面积,应用ELISA检测大鼠脑组织中的炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α的水平,并检测大鼠脑组织中的超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的含量变化,运用HE染色、尼氏染色观察脑组织病理变化、TUNEL法检测脑组织细胞凋亡,使用免疫荧光方法观察大鼠脑缺血后NeuN表达以及小胶质细胞激活情况和激活后的小胶质细胞M1标志物CD16/32及M2标志物CD206的表达情况。建立BV2小胶质细胞体外氧糖剥夺(oxygen and glucose deprivation,OGD)模型,采用CCK-8法检测细胞的生存率,Real-time PCR方法检测BV2小胶质细胞极化分型标志物的mRNA表达变化,利用Western blot实验检测NF-κB通路中关键蛋白iκB、p-iκB和p-p65蛋白水平表达变化。结果:1.丹参酮ⅡA及其衍生物YZD-27能显著降低大鼠的神经行为学评分,改善大鼠神经缺损症状,缩小脑梗塞面积,抑制促炎因子IL-1β(P0.05)、IL-6(P0.01)、TNF-α(P0.01)的分泌,明显升高大鼠缺血脑组织SOD活性(P0.001),下调MDA含量(P0.05);HE和尼氏染色显示,丹参酮ⅡA及YZD-27处理组可以减轻神经元细胞显微结构损伤;TUNEL染色显示,丹参酮ⅡA及YZD-27处理组可以减少大鼠脑缺血后脑组织细胞的凋亡;免疫荧光显示,丹参酮ⅡA及YZD-27处理组可以增加大鼠脑缺血后神经元数目。2.丹参酮ⅡA及其衍生物YZD-27提高了OGD诱导BV2小胶质细胞的生存率(P0.05),使得OGD诱导的BV2小胶质细胞M1型标志物(CD11b、CD32、iNOS)的mRNA表达均显著降低(P0.05)及OGD诱导的M2型标志物(Arg-1、CD206、IL-10)的mRNA表达均显著升高(P0.05);抑制了大鼠缺血脑组织中小胶质细胞的激活和M1型标志物CD16/32的表达(P0.01),促进了M2型标志物CD206的表达(P0.001)。3.丹参酮ⅡA及其衍生物YZD-27使得iκB蛋白表达显著上调(P0.05),p-iκB和p-p65蛋白的表达均显著下调(P0.001);加入NF-κB抑制剂BAY-11-7082后,丹参酮ⅡA及其衍生物YZD-27均能使p-p65蛋白显著下调(P0.001)。结论:1.丹参酮ⅡA及其衍生物YZD-27具有脑缺血保护作用。2.丹参酮ⅡA及其衍生物YZD-27在体内外脑缺血模型中抑制小胶质细胞激活,降低激活后小胶质细胞M1型标志物,升高M2型标志物,促进小胶质细胞M1型向M2型的极化,可能与神经保护作用有一定的关系。3.丹参酮ⅡA及其衍生物YZD-27通过调节iκB、p-iκB、p65、p-p65来调控BV2小胶质细胞极化作用,这与NF-κB信号通路有一定的关系。
【学位授予单位】：安徽中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5
【图文】：

采用线栓法制备大鼠大脑中动脉栓塞模型（middle cerebral artery occlusion，，缺血 2h 再灌注 24h 后进行神经行为学评分，TTC 染色测定脑梗塞面积，ISA 检测大鼠脑组织中的炎症因子 IL-1β、IL-6、TNF-α的水平，并检测大中超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）的含量变化，运用 HE 染染色和 TUNEL 法以及免疫荧光法观察脑组织的病理变化。材料和方法验材料试药物酮 IIA 分子量 294.34，YZD-27 分子量 418.29，由海军军医大学药学院天学教研室张卫东教授提供，结构式见下图：

YZD-27结构

第一部分 丹参酮 IIA 及其衍生物 YZD-27 对脑缺血的保护作用研究果酮 IIA 及其衍生物 YZD-27 对大鼠神经行为学的影组无神经功能损失，大鼠脑缺血 2h 再灌注 24h 后，神经行型组大鼠头偏向患侧，患侧眼裂变窄，肢体无力，提尾时行为学评分为 2.21±0.41，与假手术组相比明显升高（P＜，丹参酮 IIA 组（P＜0.05）、YZD-27 组（P＜0.05、P＜0）（P＜0.01）均能明显降低大鼠神经行为学评分，结果见

【参考文献】

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本文编号：2754195