半夏当归赤小豆汤抗肿瘤作用及机制研究

发布时间：2020-07-14 06:56

【摘要】：背景:在全球领域,癌症是因病患致死的第二大原因。GLOBOCAN 2018年的估计显示,世界上每五分之一的男性和六分之一的女性患有癌症,八分之一的男性和十分之一的女性将在75岁之前死于癌症。转移占癌症患者死亡原因的绝大多数。致使肿瘤转移的病理机制极其繁杂,血液高凝状态被视为重要影响因素。有大量的研究报道,血液高凝状态加速肿瘤的进程,并且和转移高度相关。血液高凝状态是一种血栓前状态,是诱发血栓的主要因素。肿瘤本身存在诸多易凝因素,例如:炎症及低氧微环境长期作用,会引起血管内皮细胞损伤,血小板和凝血系统的激活,促进高凝状态的形成。由此可见,肿瘤与高凝状态之间相互促进。因此,针对肿瘤血液高凝状态的抗肿瘤治疗来控制病情的进展和转移是当前研究的重要热点内容。中国传统医药在肿瘤的治疗中有着悠久的历史,其取材方便,不良反应低,价格便宜,且在提高患者免疫力,保留患者脏器功能和提高患者生存质量方面有明显的优势,能够在西医治疗基础上起到很好的辅助治疗作用,所以被广泛研究并应用于临床。目的:本研究根据半夏燥湿化痰、消痞散结,当归活血扶正,赤小豆解毒排毒的功效,在传统方剂当归赤小豆汤的基础上添加配伍成半夏当归赤小豆汤,观察其对肿瘤生长和转移的影响及其可能机制。方法:体外实验:MTT检测半夏当归赤小豆汤对A549细胞增殖的影响;划痕实验检测半夏当归赤小豆汤对A549细胞迁移的影响;Annexin V/PI双染检测半夏当归赤小豆汤对A549细胞凋亡的影响。体内实验:分别建立乌拉坦诱导的肺癌小鼠模型与H22肝癌肺转移模型,观察半夏当归赤小豆汤对荷瘤小鼠一般生存状况(体重、自主活动)、肺瘤结节数、存活率(乌拉坦模型)及肺转移瘤转移指数(H22肝癌肺转移模型)的影响,收集血液检测凝血相关指标:血小板计数、凝血时间(CT)、血浆粘度、凝血四项(PT、APTT、TT、FIB)的变化,HE染色检测肺组织病理学特征,评价半夏当归赤小豆汤对小鼠肺癌的治疗效果以及对抗转移作用。为了进一步探索半夏当归赤小豆汤的抗肿瘤的机制,在体外实验中,免疫印迹法检测半夏当归赤小豆汤对A549细胞增殖标志物PCNA、Ki67、EMT标志物Ecadherin、N-Cadherin,以及HIF-1α的表达,试剂盒检测半夏当归赤小豆汤对A549细胞乳酸分泌的影响。在乌拉坦模型中,伊文思蓝法检测药物对小鼠肺血管通透性的影响,免疫组化法检测半夏当归赤小豆汤对小鼠肺组织CD62p、Vcam1和HIF1α表达的影响,试剂盒检测小鼠血清ROS、IL-6、TNF-α、TGF-β1及乳酸含量水平的变化,免疫印迹法检测半夏当归赤小豆汤对小鼠肺组织E-cadherin、N-Cadherin、Snail以及HIF1α表达的影响。结果:体外实验结果显示:半夏当归赤小豆汤对A549细胞增殖和迁移有一定的抑制作用,对A549细胞的促凋亡作用不显著。体内实验结果显示:半夏当归赤小豆汤对荷瘤小鼠体重无显著影响,但可以改善小鼠自主活动能力,减少肺部瘤结节数,改善肺部病理学特征,对血小板计数、TT及FIB水平无显著影响,但可以降低血浆黏度,延长PT、APTT和凝血时间,此外,药物可以降低乌拉坦诱导的肺癌小鼠死亡率,降低H22肝癌肺转移模型小鼠肺部转移瘤转移指数。机制研究结果显示:半夏当归赤小豆汤下调A549细胞恶性增殖标志物PCNA、Ki-67,EMT标志物N-Cadherin蛋白表达,上调E-Cadherin蛋白表达,下调HIF-1α表达,并降低A549细胞乳酸含量;在乌拉坦诱导的肺癌小鼠模型中,药物可以降低小鼠肺血管通透性,降低血小板活化标志物CD62p、血管内皮细胞损伤标志物Vcam1和HIF-1α表达,降低ROS、IL-6、TNF-α、TGF-β1及乳酸含量水平,下调N-Cadherin、Vimentin、Snail和HIF-1α的蛋白表达,上调E-Cadherin蛋白表达。结论:综上所述,半夏当归赤小豆汤通过调节肿瘤低氧微环境,改善缺氧所致的炎症微环境,解除高凝状态,抑制EMT,有效的改善了小鼠的生存状态,抑制了癌症的进程。
【学位授予单位】：河南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285
【图文】：

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半夏当归赤小豆汤抗肿瘤作用及机制研究.4 实验结果.4.1 半夏当归赤小豆汤对乌拉坦诱导的肺癌小鼠模型的影响1）半夏当归赤小豆汤对乌拉坦诱导肺癌小鼠体重、自主活动的影响验开始时，小鼠的体重、自主活动两组间比较无显著性差异，P＞0.05不同组间小鼠体重及自主活动的比较见表 3-1。和正常组的小鼠体重、模型组和给药组都有显著下降；就小鼠体重而言，模型组和给药组并给药组的自主活动能力却有明显提高。

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第三章半夏当归赤小豆汤对荷瘤小鼠生长及转移的干预作用表 3-2 不同组间小鼠存活率的比较观察指标正常组模型组给药组 2P存活率 100% 53.3%* 86.7%# 10.893 0.004注：Log Rank（Mantel-Cox）检验。*表示模型组和正常组比有显著差异；△表示给药组和正常组比有显著差异；#表示给药组和模型组比有显著差异。（3）半夏当归赤小豆汤对乌拉坦诱导肺癌小鼠肺部瘤结节数的影响两组比较结果有显著性差异，即给药组的小鼠肺部瘤结节数较模型组有显著减少（P＜0.05）。（见图 3-3、表 3-3）

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图 3-4 乌拉坦小鼠肺组织 HE 染色Fig.3-4 HE staining of urethane-induced model mouse lung tissues（5）半夏当归赤小豆汤对乌拉坦诱导肺癌小鼠血小板计数、凝血时间及血浆黏影响和正常组比，模型组和给药组的小鼠血小板计数有明显升高，而给药组与模型，小鼠的血小板计数没有显著差异；模型组与正常组比较，小鼠的凝血时间明显，血浆粘度明显增高，给药组较模型组凝血时间明显延长，血浆粘度显著降低，组与正常组比较凝血时间和血浆黏度无显著性差异。（见图 3-5、表 3-5。）

【参考文献】