虎纹克胰素与运动干预下阻塞性黄疸肝细胞损伤修复机制的初步研究

发布时间：2020-07-17 00:58

【摘要】：研究目的:以人工手术导致小鼠黄疸为模型,以中小强度运动及虎纹克胰素尾静脉注射为干预手段。观察虎纹克胰素联合中等强度有氧运动对小鼠阻塞性黄疽的干预研究,探讨阻塞性黄疸继发性肝损伤中可能的作用及分子机制。研究方法:50只KM小鼠随机分为5组:健康小鼠,模型对照组、虎纹克胰素组(0.3μg/g)、有氧运动组、运动联合虎纹克胰素组。其中除正常组外都以总胆管悬挂至腹壁48小时构建小鼠阻塞性黄疸致重症肝损伤模型。从高中低剂量组的血生化指标中判断出最佳剂量,以此参与到运动与克胰素联合用药组中。应用苏木精一伊红染色(HE染色)对各组小鼠肝脏组织损伤情况进行显微结构形态学观察;生物化学法测定白蛋白,谷酰胺转肽酶(R-GT)、碱性磷酸酶(AKP)、总胆红素(TBIL)含量,免疫组化法检测肝脏组织TNF-α IL-6、NF-κB的蛋白表达;RT-PCR技术检测TNF-α、IL-6、NF-κB表达;RNAseq技术扫描mRNA表达谱。研究结果:①HE染色显示:正常组肝索排列整齐;模型组小鼠肝细胞大量纤维化,可见大片状肝细胞变性、坏死,乃至出现核质分离空泡;虎纹克胰素组、单纯运动组可见肝细胞少量点、片状坏死,肝小叶结构改变,肝索排列欠整齐;虎纹克胰素+运动组无明显组织坏死,肝小叶结构基本正常,肝索排列较整齐。②血清学结果:虎纹克胰素+运动组TBIL、AKP、R-GT水平较模型组显著降低(P0.01),虎纹克胰素组、单纯运动组TBIL、AKP、R-GT水平也显著下降(P0.05)。③免疫组化显示TNF-α IL-6、NF-κB阳性表达最低;肝组织内TNF-α、IL-6、NF-κB表达较模型对照组低。④RT-PCR结果显示:与模型组比较,虎纹克胰素+运动组小鼠血清TNF-α NF-KB、IL-6表达降低(P0.01)。⑤RNAseq结果显示:主要涉及细胞外基质受体作用、细胞黏附分子、黏着斑、代谢途径、氨基酸等。结论:中等强度有氧运动联合虎纹克胰素尾静脉注射对小鼠阻塞性黄疸的有良好的促进修复的作用,能增强阻塞性黄疸致重症肝损伤小鼠的免疫功能,从而明显减轻阻黄致小鼠肝损伤的程度。
【学位授予单位】：湖南师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5
【图文】：

胆囊,小鼠,胆管阻塞,阻塞性黄疸

ＨＷＴＸ－１１与运动干预下阻塞性黄疸肝细胞损伤修复机制的研究３结果逡逑阻黄造模情况逡逑与健康小鼠相比，手术２４ｈ后，模型组小鼠尿液颜色明显加深，约４及耳尖开始出现黄染。随胆管阻塞时间的延长，症状逐渐加重，小鼠状态逐渐恶化。建模过程中，未发生意外死亡情况。后随机抽取小鼠胆管畸形与胆囊肿大，血液生化显示胆红素水平超标，肝脏微结构观紊乱。以此判断造模成功。逡逑

量效曲线,组织病理,肝索,肝小叶

逦１逦１．２逡逑图３－２不同剂量虎纹克胰素对黄疸量效曲线逡逑得出虎纹克胰素量效曲线，从中看出在0．３ｕｇ／ｇ时，出现较高药效强度，并逡逑筛选出最佳剂量为0．３ｕｇ／ｇ。逡逑３．３肝脏形态学观察逡逑ＨＥ染色结果显示：健康小鼠的肝索清晰完整（图五Ａ）；模型组小鼠肝逡逑细胞出现核膜溶解空泡（图五Ｂ）；克胰素组与纯运动组可见肝细胞少量点、逡逑片状坏死，肝小叶结构改变，肝索排列欠整齐（图五Ｃ＼Ｄ）；虎纹克胰素＋运动逡逑组组无明显坏死，肝小叶结构基本正常，肝索排列较整齐（图五Ｂ）。逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１逡逑Ａ．逦八逡逑图３－３：各组小鼠肝组织病理切片ＨＥ染色图（２００Ｘ）逡逑注：图Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ分别表示健康小鼠、模型组、虎纹克胰素组、运动组、虎纹克胰逡逑素＋运动组。逡逑１３逡逑

组织病理,黄疸,药效,小鼠

．逦八逡逑图３－３：各组小鼠肝组织病理切片ＨＥ染色图（２００Ｘ）逡逑注：图Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ分别表示健康小鼠、模型组、虎纹克胰素组、运动组、虎纹克胰逡逑素＋运动组。逡逑１３逡逑

【参考文献】