绞股蓝多糖对小鼠腹腔巨噬细胞影响的研究

发布时间：2020-07-17 03:02

【摘要】：本研究采用中性红吞噬法、格里斯(Griess)试验、双抗体夹心法以及荧光定量 PCR(Quantitative real time polymerase chain reaction,qRCR)技术分别测定了巨噬细胞的吞噬能力,增殖能力,一氧化氮(Nitric oxide,NO)的分泌量,乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase,LDH)、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白介素 1β(Interleukin 1 beta,IL-1β)的分泌量以及巨噬细胞钙调素(Calmodulin,CaM)、刺激性G蛋白α(Stimulatory GTP-blinding protein alpha,GSα)基因的表达,探索不同浓度的绞股蓝多糖(Gynostemma pentaphyllum polysaccharides,GPP)对小鼠腹腔巨噬细胞的影响,进一步探讨GPP在机体免疫功能的调节作用及其可能的作用机理,为GPP的临床应用和进一步开发提供理论依据。结果表明:1、经GPP处理后的腹腔巨噬细胞吞噬能力都有所增强。不同浓度的GPP刺激小鼠巨噬细胞后,吞噬能力无明显的量效关系,其中GPP的浓度为200μg/mL时,吞噬活性最高,与空白对照组相比差异显著(P0.05)。2、从腹腔巨噬细胞增殖水平来看,不同浓度的GPP处理组都可以促进小鼠腹腔巨噬细胞增殖。当GPP的浓度达到50μg/mL及以上时,与空白对照组相比差异显著(P0.05),但其组间差异不明显。3、不同浓度的GPP刺激小鼠腹腔巨噬细胞均能显著促进NO分泌(P0.05),且NO分泌量随着GPP浓度的增加而增加。4、经各浓度GPP和LPS作用后的小鼠腹腔巨噬细胞,其分泌LDH的量均有所增加,但不呈正相关。其中GPP浓度为50μg/mL和100μg/mL时,与空白对照组相比,差异显著(P0.05)。5、从TNF-α的分泌水平来看,当GPP的浓度达到25 μg/mL及以上时,巨噬细胞TNF-α的分泌量较对空白照组而言差异显著(P0.05);且随着GPP浓度的增加,TNF-α的分泌量增加比较明显,当浓度达到100μg/mL时达到最大值,当GPP浓度继续增加时,TNF-α的分泌量下降。6、从IL-1β的分泌量来看,当GPP的浓度达到25 μg/mL及以上时,巨噬细胞的IL-1β分泌量与空白对照组相比显著差异(P0.05),且随着GPP浓度的增加,IL-1β的分泌量增加比较明显,当GPP为100μg/mL时对IL-1β分泌的促进作用最强(P0.05),之后IL-1β的分泌量会随着浓度的增加而减少。7、各GPP给药组均可提高小鼠腹腔巨噬细胞钙调素基因的表达,与空白对照组相比,25μg/mL及以上GPP给药组均有显著性差异(P0.05)。其中GPP浓度在100 μg/mL时CaM基因表达量达到最高,之后CaM基因表达量会随着浓度的增加而降低。8、不同浓度的GPP都可显著提高小鼠腹腔巨噬细胞GSα基因的表达(P0.05)。其中GPP浓度在25μg/mL时,对小鼠腹腔巨噬细胞GSα基因的表达促进作用最强。结论:GPP对小鼠腹腔巨噬细胞有活化作用,GPP能刺激巨噬细胞增殖从而增加小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬能力,能提高小鼠腹腔巨噬细胞分泌NO以及细胞因子LDH、TNF-α和IL-1β,能上调CaM和GSα基因的表达。综合本研究实验结果来看,当GPP浓度为50μg/mL时,效果明显;100 μg/mL时效果最佳。
【学位授予单位】：广西大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5
【图文】：

（Ｇｒｏｕｐ）逦（｜ｉｇ／ｍＬ）逡逑空白对照组（Ｃｏｎｔｒｏｌ）逦－逦０．４１２±０．０５３ａ逡逑ＰＳ邋对照组（ＬＰＳ邋ｃｏｎｔｒｏｌ）逦１０逦０．５１０邋±0．0４３ｂｃ逡逑１２．５逦０．４６１土０．０２０ａｃ逡逑２５逦０．４６３±０．００３２ａｃ逡逑ＧＰＰ逦５０逦０．４７３邋±０．０２５ｂｃ逡逑１００逦０．４８０邋士０．０７２１５０逡逑２００逦０．５０６邋±０．０２９邋ｂｃ逡逑列不同字母上标表示差异显著（尸＜０．０５邋）。Ｎｏｔｅ：邋Ｖａｌｕｅｓ邋ｉｎ邋ｓａｍｅ邋ｃｏｌｕｍｎ邋ｗｉｔｈ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋Ｓｕｐｅｒｓｃｒｔｌｙ邋（尸＜０．０５）．逡逑ＰＰ对小鼠腹腔巨噬细胞分泌］ＶＯ产生的影响逡逑绘制标准曲线逡逑

为探究不同浓度ＧＰＰ对小鼠腹腔巨噬细胞分泌ＬＤＨ产生的影响，将巨噬细胞给予逡逑不同浓度的ＧＰＰ或ＬＰＳ培养４８ｈ后，取细胞培养上清液，测定ＬＤＨ的浓度。结果如逡逑图２－４所示（具体数据见附表１－２），ＬＰＳ处理组和各浓度ＧＰＰ组小鼠腹腔巨噬细胞分逡逑泌ＬＤＨ的含量均有所增加，但不呈正相关。当ＧＰＰ浓度达到２５ｐｇ／ｍＬ时，巨噬细胞逡逑分泌ＬＤＨ的量就接近稳定，其中ＧＰＰ浓度为５０邋ｐｇ／ｍＬ和１００阳／ｍＬ时，与空白对照组逡逑相比，差异显著（Ｐ＜0．0５）。逡逑４０－．逡逑ｂ逦＿■邋Ｃｏｎｔｒｏｌ逡逑ａ邋ｙ邋＾邋Ｔ逦ｙ逦＊？■＇逦１２．５逡逑ｉ２0Ｊ｜ｉ｜｜ｌ｜邋＝：：逡逑岕＿ｈ逡逑＃邋Ｐ逦＾邋＃逡逑ｃＰ逡逑Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ（Ｍｇ邋／ｍＬ）逡逑图２￣４邋ＧＰＰ对小鼠腹腔巨噬细胞分泌ＬＤＨ的影响逡逑Ｆｉｇ．邋２－４邋Ｅｆｆｅｃｔｓ邋ｏｆ邋ＧＰＰ邋ｏｎ邋ＬＤＨ邋ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｍｉｃｅ邋ｐｅｒｉｔｏｎｅｒａｌ邋ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ逡逑注：不同字母表示差异显著（户＜０．０５）。Ｎｏｔｅ：邋Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔｓ邋ｄｉｆｆｅｒ邋ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ邋（Ｐ＜０．０５）．逡逑２５逡逑

２．３．５．１绘制标准曲线逡逑将邋ＴＮＦ－ａ标准品倍比稀释为邋５邋个浓度（８００ｎｇ／Ｌ、４００ｎｇ／Ｌ、２００ｎｇ／Ｌ、１００ｎｇ／Ｌ、逡逑５０邋ｎｇ／Ｌ）按照试剂盒说明操作后绘制标准曲线，如图２－５所示，ＴＮＦ－ａ的摩尔浓度与其逡逑ＯＤ值呈线性关系，标准曲线的公式为：ｙ邋＝邋０．０００７ｘ邋＋０．０５２３，其中Ｒ２邋＝邋０．９９１２。逡逑０．７邋－｜逡逑0邋６邋．逦ｙ＝Ｏ．ＯＣＫ）７ｘ邋－ｒ邋０．０５２３逡逑Ｒ２邋＝邋０．９９１２逡逑＝０．４邋－逦ｙ逡逑％逡逑§逡逑０１逡逑Ｏ邋－Ｈ逦１逦１逦１逦１逦１逡逑０逦２００逦４００逦６００逦ＳＯＤ逦ＩＯＯＯ逡逑Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｍ逡逑图２－５梯度浓度ＴＮＦ－ａ标准溶液吸光值逡逑Ｆｉｇ．邋２－５邋Ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ邋ｏｆ邋ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ邋ｇｒａｄｉｅｎｔ邋ｏｆ邋ＴＮＦ－ａ邋ｓｔａｎｄａｒｄ邋ｓｏｌｕｔｉｏｎ逡逑２．３．５．２不同浓度ＧＰＰ对小鼠腹腔巨噬细胞分泌ＴＮＦ－ｃｔ产生的影响逡逑巨噬细胞给予不同浓度的ＧＰＰ或ＬＰＳ培养４８邋ｈ后，取细胞培养上清液，测ＴＮＦ－ａ逡逑的浓度。结果由图２－６可以发现（具体数据见附表１－３），当ＧＰＰ的浓度达到２５吗／ｍＬ逡逑及以上时，巨噬细胞ＴＮＦ－ａ的分泌量较对空白照组而言差异显著ＣＰ＜０．０５）；且随着ＧＰＰ逡逑浓度的增加，ＴＮＦ－ａ的分泌量增加比较明显，当浓度达到１００邋｜ｉｇ／ｍＬ时达到最大值，逡逑此时与ＬＰＳ对照组促巨噬细胞所分泌ＴＮＦ－ａ的含量相当；当ＧＰＰ浓度继续增加时

【参考文献】

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1 王旭东;毛伟;关红;李培锋;周蕾;;TCDCA对大鼠肺泡巨噬细胞钙调素基因表达的影响[J];内蒙古农业大学学报(自然科学版);2015年05期

2 胡敬峰;王远红;李帅;高群;吕志华;;仿刺参糖胺聚糖对小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响[J];中国海洋药物;2014年06期

3 范艳丽;郑国强;刘安军;;龙须菜酸性多糖对H22荷瘤小鼠的抗肿瘤作用[J];现代食品科技;2014年09期

4 王迎进;马文辉;李嘉慧;何s

本文编号：2758891