窦永起教授治疗肿瘤学术思想总结及黄芪—莪术配伍抗肿瘤血管生成机制研究

发布时间：2020-07-17 03:37

【摘要】：目的:整理总结导师临床辨病与辨证相结合诊治肿瘤的学术思想,并通过动物实验和细胞实验,研究阐明导师常用益气活血配伍黄芪-莪术的抗肿瘤效果及其抗肿瘤血管生成的作用机制。方法:1.学术思想总结方法:通过整理、总结导师的理论授课、临证讲解、学术论文、专题讲座等资料,参考古今中医相关文献,结合同学讨论,分析归纳导师在治疗肿瘤类疾病方面的临床经验和用药规律,对导师辨病与辨证相结合诊治肿瘤的学术思想进行系统总结。2.动物实验研究方法:皮下注射瘤细胞构建C57BL/6小鼠Lewis肺癌荷瘤模型,随机分为模型组、顺铂组(DDP)、黄芪及莪术单药组、黄芪-莪术1:1,2:1,3:1配伍组。中药组予相应剂量药物灌胃15d,DDP组在第1,3,5,7,9,11,13,15d腹腔注射顺铂(2mg/kg),给药期间测量小鼠体重及肿瘤体积变化。第16d处死小鼠后,计算瘤重指数、抑瘤率、胸腺及脾脏指数,计数肺转移结节,H-E染色分析瘤组织病理学变化。选择模型组、DDP组、黄芪-莪术1:1,2:1,3:1配伍组的瘤组织进行抗肿瘤血管生成相关检测,免疫组化法检测瘤组织微血管密度(MVD);Western Blot检测瘤组织TGF-β1/MAPKs/HIF-lα信号通路关键因子的表达。3.细胞实验研究方法:采用均匀试验设计对黄芪-莪术配伍中4种已知的有效成分黄芪多糖、黄芪总皂苷、姜黄素、β-榄香烯进行最优组分配伍筛选,并观察最优组分配伍(E)在不同浓度和时间条件下对A549细胞增殖抑制的干预效果。将A549细胞分为空白对照组、CoCl2对照组、DDP+CoC12组(DDP)、0.5E+CoC12组(0.5E)、E+CoC12组(E)、2E+C0Cl2组(2E)进行干预,流式细胞仪检测细胞凋亡率,应用Western Blot法检测凋亡相关的Bax、Bcl-2、caspase-3蛋白及血管生成相关的TGF-β1/MAPKs/HIF-lα信号通路关键因子表达水平。结果:1.学术思想总结结果:肿瘤具有共同的发病基础及相似的病理机制,而现代治疗手段在治疗肿瘤的同时又可能成为损伤人体的病理因素;将肿瘤的不同发展阶段、不同临床特征、不同治疗手段,均纳入“辨病论治”范畴,并运用中医学相关理论对其进行辨病、辨证相结合的诊治,将个体化、动态化的中医治疗优势体现在肿瘤综合治疗的全过程中。2.动物实验研究结果:各药物组的瘤重明显低于模型组(P0.05);各中药组在抑制瘤重和肺转移方面不如DDP组,但3:1配伍组与DDP组的瘤重指数和肺转移灶数目差异不显著(P0.05);各中药组的胸腺和脾脏指数高于DDP组(P0.01)。各药物组MVD计数低于模型组(P0.01);各配伍组的MVD计数多于DDP组(P0.05)。DDP组、2:1和3:1配伍组的VEGF、TGF-βl表达低于模型组(P0.01);3:1配伍组VEGF表达低于DDP组(P0.01)。各药物组的HIF-1表达低于模型组(P0.01);3:1配伍组与DDP组相比无显著性差异(P0.05),且低于其它配伍组(P0.01)。各配伍组的p38MAPK、p-p38MAPK表达低于模型组及DDP组(P0.01)。各药物组的ERK1/2、p-ERKl/2和JNK、p-JNK表达较模型组显著降低(P0.01);3:1、2:1配伍组的ERK1/2、p-ERKl/2表达均低于 DDP 组(P0.01);2:1 配伍组 p-JNK 表达低于 DDP 组(P0.01)。3.细胞实验研究结果:黄芪-莪术配伍中4种已知有效成分的最佳配伍组合(E)为200mg/L黄芪多糖联合32mg/L姜黄素,E以剂量和时间依赖性的方式抑制A549细胞增殖。在化学缺氧环境下,E、2E组的凋亡率与DDP组差异不显著(P0.05);2E组的Bax、Bcl-2表达与DDP组相比差异不显著(P0.05),各剂量E组的caspase-3 表达均低于 DDP 组(P0.01);2E 组上调 Bax、caspase-3 及下调 Bcl-2表达的作用优于其它剂量组。2E组TGF-β1、HIF-1α VEGF表达低于DDP组(P0.01)。E、2E 组 p38MAPK、p-p38MAPK 表达均低于 DDP 组(P0.01);0.5E、2E组的JNK和p-JNK表达低于DDP组(P0.05);各剂量最优配伍组的ERK1/2、p-ERK1/2 表达均低于 DDP 组(P0.01)。结论:1.导师认为肿瘤共同的发病基础是正虚邪实、气血紊乱;共同的病理因素是气滞、血瘀、痰凝、癌毒;在辨病基础上结合中医四诊的辨证,给予因人而异的、动态中医治疗,发挥对现代医学治疗方法的增效减毒作用,能够改善肿瘤患者的生活质量,提高中西医结合治疗肿瘤的水平。2.不同比例黄芪-莪术配伍能够抑制Lewis肺癌荷瘤小鼠移植瘤的生长和转移,降低瘤组织MVD,能够不同程度的下调TGF-β1/MAPKs/HIF-1α信号通路关键因子TGF-β1、p38MAPK、p-p38MAPK、ERK1/2、p-ERK1/2、JNK、p-JNK、HIF-1α、VEGF的表达,抑制肿瘤血管生成。3.黄芪多糖联合姜黄素是黄芪-莪术配伍中4种已知有效成分抑制A549细胞增殖的最优配伍组合,其通过调控Bax、Bcl-2与caspase-3的表达促进A549细胞凋亡;并不同程度的下调TGF-β1/MAPKs/HIF-1α信号通路关键因子TGF-β1、p38MAPK、p-p38MAPK、ERK1/2、p-ERK1/2、JNK、p-JNK、HIF-1α、VEGF 的表达,抑制肿瘤血管生成。
【学位授予单位】：中国人民解放军医学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5
【图文】：

逡逑给药结束后，剥取小鼠前肢腋下的瘤组织，观察其大体形态（图２）。模型组瘤逡逑组织体积较大，剥离时比较费力，部分瘤体表面出现溃疡，瘤体内部组织结构松散，逡逑伴有“中心性坏死”现象；顺铂组的瘤组织体积最小，较模型组更容易剥离；各中药逡逑组中，单药组瘤组织体积较配伍组大，且有部分出现“中心性坏死”现象，配伍组中逡逑瘤体表面溃疡及“中心性坏死”现象出现次数较模型组减少。逡逑实验结果显示（见表１）：各药物干预组的抑瘤率排序为：ＤＤＰ组＞３：１配伍组＞２：１逡逑配伍组＞１：１配伍组＞莪术单药组＞黄芪单药组。与模型组相比，各干预组的瘤重明显逡逑降低（Ｐ＜０．０５）；各中药配伍组与顺铂组相比，在抑制瘤重方面不如顺铂组效果好，但逡逑３：１和２：１配伍组与顺铀组的瘤重指数相比差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。３：１配伍组逡逑对瘤重的抑制效果优于其它配伍组（Ｐ＜0．0５），且３：１和２：１配伍组的瘤重均低于黄逡逑芪单药组和莪术单药组（Ｐ＜０．０５），而１：１配伍组的瘤重与各单药组相比差异无统计逡逑学意义（Ｐ＞０．０５）。单药组中

图４各组瘤组织ＭＶＤ的免疫组织化学检测（ＩＨＣ４００Ｘ）

解放军医学院中医师承制博士学位论文＜ｆ！；－－＾＞：－ｘ：；＾；逡逑．．邋？邋．邋．邋、逡逑■邋，邋－ｓ邋－逡逑．－＇．．．邋？－邋：逡逑＇邋…逡逑－邋．－．？逦——邋＇．逡逑．卜邋＇．灥，逦．ＰＤＰＳＢ邋、逦－逦１：＾邋＇逡逑－？邋－？－＇：？邋．邋：．ｖ－邋．．逡逑２：１邋灥逦＇逦３：料：逡逑图４各组瘤组织ＭＶＤ的免疫组织化学检测（ＩＨＣ４００Ｘ）。逡逑４０－Ｉ逡逑

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