TY501对COPD的治疗疗效及机制的探索研究

发布时间：2020-07-19 07:32

【摘要】：目的:以往的研究均表明甘草次酸具有抗炎、抗氧化、调节免疫等药理作用。作为甘草次酸类衍生物,在实验室之前的研究中已经显示,其对肝肾损伤、机体炎症、肺部纤维化体内外模型均有较好的效果。本研究旨在初步探索TY501雾化吸入剂对慢性肺阻性疾病(COPD)的疗效和相关作用机制并为COPD新药的研发提供新的途径和思路。方法和结果:1.TY501对甲醛致急性COPD大鼠模型的影响:36只大鼠采用雾化吸入甲醛的方式造模。实验中设置TY501组、布地奈德组、模型组、空白组,每组随机分配12只大鼠。各组分别雾化给予TY501、布地奈德、生理盐水,空白组不做处理。实验结束后测定肺重指数、氧分压,测定肺泡灌洗液(BALF)中TNF-a、IL-8含量,并进行BALF白细胞计数,测定肺组织匀浆中谷胱甘肽(GSH)水平。结果表明,模型组肺重指数较正常组肺重指数显著性增加,模型组PaO2、BALF中TNF-a、IL-8水平及肺组织匀浆中GSH水平较正常组均显著性降低(P0.01)。表明由吸入甲醛构建的大鼠模型具有肺部损伤及炎症的基本特征,可以用于药物疗效的比较;TY501组和布地奈德组的肺重指数、PaO2、肺组织匀浆中GSH水平、BALF中TNF-a、IL-8水平中除肺组织匀浆中GSH水平TY501组高于模型组无显著性差异外,两组其余各指标对比模型组均有显著性改善(P0.05)。表明TY501能改善吸入甲醛致肺损伤大鼠模型的病理情况。2.TY501对内毒素急性肺损伤小鼠模型疗效影响昆明小鼠45只进行尾静脉注射LPS造模,每组随机分15只小鼠,分组方法同实验一。各组分别雾化给予TY501、布地奈德、生理盐水,空白组不做处理。实验结束后测定各组小鼠肺重指数、肺组织匀浆中的TNF-a、IL-8含量。结果表明,实验结束时模型组对比空白组,小鼠肺重指数、TNF-ɑ、IL-8水平均差异显著(P0.01)。结果表明尾静脉注射LPS急性小鼠模型肺部炎症明显,可用于TY501药物疗效及作用机制的探索;TY501组和布地奈德组肺重指数、IL-8水平、TNF-ɑ水平和模型组相比均有显著性改善(P0.05)。小鼠肺部损伤程度明显减轻,TY501组比较布地奈德组各指标水平无显著性差异。表明TY501雾化吸入对LPS急性肺损伤导致的肺部炎症具有一定的疗效。3.TY501对烟熏致慢性COPD小鼠疗效影响昆明小鼠60只,用自制烟熏箱进行为期8周的烟熏造模。每组随机分20只小鼠,分组及给药方法同实验一。记录小鼠实验过程中基本情况和体重变化,实验结束后测定小鼠肺重指数,测定小鼠肺组织匀浆中TNF-ɑ、IL-8水平,制作观察肺组织病理切片,测定小鼠血清炎症细胞水平。结果表明,模型组的肺重指数、肺组织匀浆中TNF-ɑ和IL-8水平及血液中白细胞水平均显著性高于空白组,肺部病理学切片显示和正常组病理学切片相比模型组小鼠部分肺叶呈重度肺气肿。结果表明烟熏致慢性肺气肿小鼠模型和正常肺气肿病理相似,可以用于TY501药效评价;TY501组和布地奈德组肺重指数,血液中白细胞水平较模型组有显著性差异。组两组肺组织匀浆中TNF-ɑ水平和IL-8水平分较模型组均有降低。肺部病理学切片显示比较模型组的重度肺气肿,两组均只有少量肺泡呈轻度代偿性肺气肿。结果表明TY501能较好改善烟熏致慢性肺气肿小鼠模型的病理状态。4.TY501对急性COPD大鼠基因测定探索采用实验一中大鼠肺组织,对各组大鼠肺组织进行基因的提取、测序、并用软件做差异分析。对差异表达基因进行模式聚类、功能注释以及富集性分析。结果表明,两治疗组间差异基因数显著性少于治疗组和模型组间差异基因数(P0.01)。差异基因聚类表达分析图谱显示TY501组和布地奈德组基因之间较两组和模型组间基因功能更为相似,表明两组均在一定程度上改变了模型组基因表达方式;差异表达基因KEGG通路富集分析显示富集显著性最大的差异基因为:TY501对比模型组为细胞因子和细胞因子相互作用相关基因和精氨酸和脯氨酸代谢基因。布地奈德组对比模型组为白细胞跨膜转运基因、PPAR型号通路相关基因和ECM受体相互作用基因。布地奈德对比TY501主要为细胞因子和细胞因子相互作用相关基因。结论:通过急性和慢性模型,表明TY501具有明确的治疗COPD的作用,作用机制与抑制肺部炎症细胞及炎症因子(TNF-ɑ、IL-8)水平有关。
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5
【图文】：

肺部,小鼠,图片,布地奈德

正常组布地奈德组图 2.1 各组小鼠肺部图片2.3.4 小鼠肺组织匀浆中 TNF-ɑ、IL-8 浓度比较如下表 2.2 和图 2,2 所示，模型组小鼠肺组织匀浆中 TNF-ɑ、IL-8 水平性高于空白组（P<0.01）。TY501 组和布地奈德组 TNF-ɑ、IL-8 水平显著于模型组（P<0.05）。表 2.2 小鼠肺组织匀浆中 TNF-ɑ、IL-8 浓度比较（ X S）组别例数 TNF-a(pg/ml) IL-8(pg/ml模型组 A 10 185.57 33.34#92.79 21.55TY501 组 B 13 165.54 36.02 77.67 16.54布地奈德组 C 14 156.68 29.02* 75.35 15.86空白组 D 15 131.24 30.39 68.53 21.8注：#表示 A 和 D 比较 P<0.01;*表示 B、C 和 A 比较 P<0.05

小鼠,布地奈德,硕士学位论文,医科大学

津医科大学硕士学位论文三、TY501 对慢性 CO3.3 小鼠肺组织匀浆中 TNF-ɑ、IL-8 浓度比较（ X 组别例数 TNF-ɑ(pg/ml) I模型组 A 20 181.59 49.56#8TY501 组 B 20 168.25 32.93 7布地奈德组 C 20 171.46 38.97 7空白组 D 20 147.78 33.89 6：#表示 A 和 D 比较 P<0.01;*表示 B、C 和 A 比较 P<0.05

分析结果图,差异对比,基因测序,大鼠

实验结果1 大鼠基因差异对比分析结果如下表 4.1 和图 4.1 所示，TY501 组和布地奈德组大鼠肺部基因和基因差异个数分别为 1379 和 1492，二者数量上相近，TY501 和布比较基因差异数仅为 460。差异基因聚类表达分析图谱显示 TY50德组基因之间较两组和模型组间基因功能更为相似，表明两组均改变了模型组基因表达方式。表 4.1 大鼠基因测序差异对比分析结果异基因对比差异基因总数上调基因下调E05 vs E04 460 224 23E05 vsE06 1379 900 47E04 vsE06 1492 983 50E05-TY501，E04-布地奈德，E06-模型组

【参考文献】