野艾蒿提取物对金黄色葡萄球菌的抑菌作用及机制研究

发布时间：2020-07-23 07:19

【摘要】：野艾蒿(Artemisia lavandulaefolia)别名:荫地蒿,野艾,小叶艾、狭叶艾,艾叶,苦艾,陈艾,多年生的草本植物。野艾蒿具有理气行血、逐寒调经、安胎、祛风除湿、消肿止血等功效,可用于治疗感冒、头痛、疟疾、皮肤瘙痒、痈肿、跌打损伤、外伤出血等症。野艾蒿在我国分布非常广泛,有很好的药用价值。目前,国内对于野艾蒿的研究工作主要集中在提取方法研究、化学成分分析、环境应用及黄酮和挥发油的生物活性等方面。而对野艾蒿抑菌作用的研究,目前仍处于初步阶段。抑菌活性研究资料表明,野艾蒿粗提物在体外对多种细菌的生长繁殖有抑制作用,但并未进行深入的研究。本文以金黄色葡萄球菌为受试菌,对野艾蒿的抑菌活性进行了较为系统的研究,以便为野艾蒿药用价值的进一步开发提供理论依据。主要研究结果如下:以95%的乙醇为溶剂,采用超声波辅助提取的方法对野艾蒿进行提取,并以干膏得率为指标对野艾蒿的提取工艺进行优化。得出野艾蒿醇提物的最佳提取工艺为:料液比1:20、提取时间2.5h、提取温度为65℃、提取功率为70W,此工艺条件下的干膏得率为18.4%;所得干膏经石油醚、乙酸乙酯和正丁醇依次萃取,得到不同的萃取组分。其中石油醚萃取物得率为18%、乙酸乙酯萃取物得率为31%、正丁醇萃取物得率为13%、水相物质得率为16%。采用水蒸气蒸馏法对野艾蒿挥发油进行提取,挥发油得率为1%。体外抑菌实验表明,野艾蒿醇提物各萃取组分及挥发油对金黄色葡萄球菌(SA)的抑菌能力大小为:乙酸乙酯萃取物正丁醇萃取物石油醚萃取物=挥发油,水相组分未测出抑菌活性。石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物、挥发油对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度(MIC)依次为10mg/ml、2.5mg/ml、5mg/ml、和10mg/ml。乙酸乙酯萃取物与正丁醇萃取物对金黄色葡萄球菌的生长曲线有明显的影响(P0.05),均能使金黄色葡萄球菌生长比较缓慢,无明显的生长对数期。体内抑菌实验表明,野艾蒿醇提物乙酸乙酯萃取物对小鼠具有体内抑菌活性。小鼠灌入浓度为0.50g/kg的野艾蒿醇提物乙酸乙酯萃取相时,体内抑菌活性最好,小鼠的死亡率为20%,比模型组的死亡率降低了77.78%。但抑菌活性强弱与野艾蒿醇提物乙酸乙酯萃取相的用量之间未见正相关。抑菌机制研究结果表明,野艾蒿醇提物乙酸乙酯萃取物能增大金黄色葡萄球菌细胞壁及细胞膜的通透性、降低胞内蛋白含量和苹果酸脱氢酶(MDH)和琥珀酸脱氢酶(SDH)比活性,能与金黄色葡萄球菌的DNA发生结合。推测其抑菌机制可能是野艾蒿醇提物乙酸乙酯萃取物与金黄色葡萄球菌的DNA发生结合后影响了DNA的复制、转录及蛋白质合成,进而使金黄色葡萄球菌细胞壁及细胞膜的通透性增大,胞内蛋白含量降低,苹果酸脱氢酶(MDH)和琥珀酸脱氢酶(SDH)比活性降低,导致菌体无法正常繁殖。
【学位授予单位】：陕西科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285
【图文】：

抑菌圈,野艾蒿,组分,金黄色葡萄球菌

1.0 软件进行统计学处理。抑菌圈的直径以 X验，P<0.05 表示有显著性差异。取组分对金黄色葡萄球菌的抑菌圈测定艾蒿各个组分的抑菌圈大小测定，测定结果表 3-4 野艾蒿各组分对金黄色葡萄球菌的抑菌圈microbial Circles of Staphylococcus aureus for Vari萃取物乙酸乙酯萃取物正丁醇萃取物水相 40 40 40 40 ±0.51 15.6±0.57 11.6±0.55 0 + ++ + — 对照+++表示高度敏感++表示中度敏感 +表示低度

菌落形态,小鼠,菌落,野艾蒿

野艾蒿提取物对金黄色葡萄球菌的抑菌作用及机制研究高剂量组与中剂量没有明显的区别，说明野艾蒿提取物的体内抑菌活性大小与野艾蒿提取物的剂量大小没有线性关系。高剂量比中剂量的死亡率高，这可能是由于小鼠个体的差异及实验操作不当造成的。也可能是灌入高剂量的野艾蒿乙酸乙酯相会对小鼠产生一定的毒副作用。郭羽[127]等研究黄芪酵母菌发酵液对金黄色葡萄球菌的体内抑菌活性，得到高浓度剂量（2.5g/mL）的发酵液体内抑菌效果最好，与本实验结果有一定的差异。这可能是由于所用原料的抑菌能力不同得到的结果也有差异。小鼠死亡后，取出心、肺、肝、肾培养，空白组各内脏培养无细菌生长，模型组和给药组的小鼠死亡后，各内脏培养均有细菌生长，且菌落形态一致（如图 3-2 所示），经过革兰氏染色在显微镜下观察菌体为球状被染成紫色(如图3-3 所示），确定为金黄色葡萄球菌。进一步说明小鼠的死亡是由于金黄色葡萄球菌感染引起的。心、肺、肝、肾培养后均有细菌生长，说明金黄色葡萄球菌可以感染小鼠的心、肺、肝、肾。

照片,革兰氏染色,肝肾,心肺

且菌落形态一致（如图 3-2 所示），经过革兰氏染色在显微镜下观察菌体为球状被染成紫色(如图3-3 所示），确定为金黄色葡萄球菌。进一步说明小鼠的死亡是由于金黄色葡萄球菌感染引起的。心、肺、肝、肾培养后均有细菌生长，说明金黄色葡萄球菌可以感染小鼠的心、肺、肝、肾。a b c d e图 3-2 各组小鼠死亡后心、肝、肾、肺培养长出的菌落Figure 3-2 Colonies of heart, liver, kidney, and lung cultures after death in each group注：a 为空白组、b 为野艾蒿萃取物高浓度组、c 为野艾蒿萃取物中浓度组、d 为野艾蒿萃取物地浓度组、e 为模型组a b c d图 3-3 死亡小鼠心肺肝肾培养后的细菌革兰氏染色照片Fig 3-3 Bacterial Gram stain photo of dead mice after heart, lung, liver and kidney culture注：a 心 b 肺 c 肝 d 肾

【相似文献】