黔产辣蓼、夜关门微量元素含量分析及夜关门对酿酒酵母的影响研究

发布时间：2020-07-23 10:22

【摘要】：目的:本研究通过对不同月份辣蓼、夜关门的微量元素含量进行分析测定,为其质量控制及开发利用提供依据。研究黔产夜关门提取物对酿酒酵母INVSC1的促增殖作用影响及其机制的初步探讨。方法:采用微波消解并电感耦合等离子体发射光谱法(ICP-OES)对辣蓼、夜关门中的(钙(Ca),钾(K),镁(Mg),锌(Zn),锡(Sn),铜(Cu),汞(Hg),砷(As),镉(Cd),钡(Ba),银(Ag),铝(Al),锰(Mn),钼(Mo),锑(Sb),钴(Co),镓(Ga),锗(Ge),铅(Pb),锂(Ni),铬(Cr),铁(Fe))等22种金属元素进行含量测定。将夜关门提取物配制成0.5、1、2、4、8、16mg/mL等不同浓度,采用比色法(OD_(600))检测不同浓度夜关门提取物干预酿酒酵母INVSC1细胞3、6、9、12、24h后对细胞增殖的影响,根据比色法结果设置夜关门提取物(4mg/mL、8mg/mL、16mg/mL)低、中、高三个剂量组和阴性对照组;于倒置显微镜下观察不同浓度夜关门提取物对酿酒酵母INVSC1细胞形态学的影响;运用实时荧光定量PCR技术定量检测酿酒酵母INVSC1中cAMP、PKA、tpk2的mRNA表达;采用蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测酿酒酵母INVSC1中cAMP、PKA的蛋白表达。结果:检测出辣蓼、夜关门中Ca、Mg、Al、K、Fe、Mn、Ag、Zn等元素较高,其精密度RSD为0.244%~2.681%,回收率89.9%~107.0%,辣蓼与夜关门中的Pb、As,Cu、Hg、Cd等有害重金属元素含量均未超标,符合《药用植物及制剂进出口绿色行业标准》的质控标准。比色法(OD_(600))检测发现夜关门提取物对酿酒酵母INVSC1有一定的增殖作用;倒置显微镜观察经夜关门提取物处理后酿酒酵母菌体变小、变圆;经实时荧光定量PCR检测到经夜关门提取物处理9 h后夜关门中、高剂量组可引起cAMP的mRNA上调,夜关门中剂量组可引起Tpk2的mRNA上调,与对照组比较差异有统计学意义(P0.05);经蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测到cAMP、PKA的蛋白表达量上调,与对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论:1.不同月份辣蓼和夜关门Pb、As、Cu、Hg、Cd含量均符合标准。2.不同浓度夜关门提取物可促进酿酒酵母INVSC1的增殖,并能改变细胞的形态。3.夜关门提取物可上调酿酒酵母INVSC1中cAMP、PKA、Tpk2基因的表达。4.夜关门提取物可上调cAMP、PKA蛋白的表达。
【学位授予单位】：贵州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R284;R285
【图文】：

酵母菌增殖相关信号通路示意图

图 1 酿酒酵母 INVSC1 生长曲线Fig.1The growth curve of Saccharomyces cerevisiae INVS2.2 夜关门提取物对酿酒酵母 INVSC1 增殖的影响由图 2 可知，夜关门提取物可以促进停滞期和对数期酿酒酵

图 2 夜关门提取物对酿酒酵母 INVSC1 增殖率的影响（ x s，n=6）Fig.2 Effect of the extract in Indigofera Pseudotinctioria Mats on the proliferatiSaccharomyces Cerevisiae INVSC1（ x s，n=6）2.3 夜关门提取物对酿酒酵母 INVSC1 细胞形态的影响倒置显微镜下观察，空白对照组中，细胞呈不规则的卵圆形或椭圆

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本文编号：2767195