红景天苷抗血小板活性及抗血栓作用的研究

发布时间：2020-07-24 05:44

【摘要】：目的:研究红景天苷(Salidroside,Sal)抗血小板活性及在体内、体外的抗血栓作用,探索其可能的机制。方法:(1)体外抗血栓实验:取昆明小鼠,麻醉,下腔静脉采血,离心制备小鼠洗涤血小板,进行以下实验:通过乳酸脱氢酶(LDH)法检测红景天苷对血小板的毒性;预先以生理盐水、红景天苷(25μmol/L、50μmol/L)孵育血小板,并以凝血酶诱导血块回缩,观察红景天苷对血块回缩的作用;采用比浊法测定洗涤血小板在ADP、凝血酶诱导下产生的聚集,在聚集达到最大时停止实验,部分血小板样品取出悬液于显微镜下观察,另一部分血小板样品迅速裂解,制备蛋白样品,检测Akt、GSK3β蛋白的磷酸化水平,同时预留部分血小板作为空白对照用于制样;血小板在凝血酶刺激后,迅速制样取上清,采用酶联免疫吸附法(ELISA)分别检测血小板的cAMP、TXB_2的含量。(2)体内抗血栓实验:取健康清洁级昆明小鼠40只,雌雄各半,随机分为4组,分别腹腔注射给予生理盐水、阿司匹林(100 mg/kg)、红景天苷低剂量组(50 mg/kg)和红景天苷高剂量组(100 mg/kg),每日1次,连续7 d,末次给药30 min后,下腔静脉采血,检测小鼠血细胞数目;取健康清洁级昆明小鼠40只,雌雄各半,分组同上,末次给药30 min后,采血,检测小鼠凝血四项;取健康清洁级昆明小鼠40只,雌雄各半,分组同上,末次给药30 min后,麻醉小鼠,用断尾流血法检测小鼠的出血时间;取40只健康清洁级雄性昆明小鼠,在连续给药5 d后,腹腔注射角叉菜胶复制小鼠尾部血栓模型,之后继续给药2 d,在造模12 h,24h,48 h时记录各组小鼠黑尾发生率以及黑尾长度。结果:(1)与空白对照组相比,不同剂量红景天苷作用于血小板后,对乳酸脱氢酶(LDH)释放量无显著性差异(P0.05);与模型组相比,预先孵育红景天苷的血小板,血块回缩明显受到抑制(P0.05);预先孵育红景天苷的血小板,在不同诱导剂作用下,聚集率明显降低,显微镜下见聚集体减小,蛋白检测表明红景天苷可以有效抑制AKT和GSK3β的磷酸化;经红景天苷孵育的血小板cAMP含量明显高于模型组(P0.05),TXB_2含量明显低于模型组(P0.05)。(2)红景天苷对小鼠的生长以及血细胞计数无显著性影响(P0.05);红景天苷对小鼠的凝血四项无显著性影响(P0.05);红景天苷可以延长小鼠断尾流血时间,差异有统计学意义(P0.05);红景天苷可明显减少角叉菜胶诱导尾部血栓,具有统计学意义(P0.05)。结论:红景天苷对体外和体内血栓具有良好的抗血栓作用,其作用机制可能是通过升高血小板cAMP含量,减少血小板TXA_2的含量,并抑制PI3K/Akt信号通路发挥作用的。
【学位授予单位】：贵州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5
【图文】：

洗涤血小板的毒性作用的影响试剂盒检测红景天苷对小鼠洗涤血小板可红景天苷各个剂量组孵育血小板后，对乳酸组无明显差异（P>0.05）。al 对小鼠洗涤血小板 LDH 释放量的影响( x±s, ns of Sal on the LDH release of washed platelets in m（μmol/L） LDH 活性（U/L） LDH 相 120.71 ± 9.96 112.5 121.78 ± 11.76 125 129.21 ± 7.51 150 122.08 ± 10.36 1100 127.06 ± 17.91 1200 135.94 ± 17.66 1— 1022.08 ± 30.70

空白对照组 模型组 替罗非班组 Sal 低剂量 Sal 高剂量图 2-2-1 在 15 min 时，不同组的血块回缩Fig. 2-2-1 Clot retraction of different groups at 15 min表 2-2-1 在 15 min 时，不同组的血块比例( x±s, n=3 )Tab. 2-2-1 Clot ratio of different groups at 15 min( x±s, n=3照组相比，**P<0.01，与模型组相比，#P<0.05，##P<0.01k control group ,**P<0.01，vs. model group#P<0.05，##P<0.01组别 剂量 血块比例对照组 — 100型组 — 38.35 ±非班组 0.5 μg/mL 82.70 ±Sal 25 μmol/L 58.16 50 μmol/L 70.66 ±

组 模型组 替罗非班组 Sal 低剂量 Sal 高剂量图 2-2-1 在 15 min 时，不同组的血块回缩2-2-1 Clot retraction of different groups at 15 min-1 在 15 min 时，不同组的血块比例( x±s, n=3 )1 Clot ratio of different groups at 15 min( x±s, n=3**P<0.01，与模型组相比，#P<0.05，##P<0.01oup ,**P<0.01，vs. model group#P<0.05，##P<0.01剂量 血块比例— 100— 38.35 ±0.5 μg/mL 82.70 ±25 μmol/L 58.16 ±50 μmol/L 70.66 ±

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本文编号：2768404