【摘要】：目的:观察淫羊藿苷(Icariin,ICA)对6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)诱导的多巴胺(Dopamine,DA)能神经元损伤的保护作用,并探讨其可能机制。方法:(1)动物实验:单侧中脑黑质注射6-OHDA(8μg)制备大鼠多巴胺能神经元损伤模型,实验随机分为5组:空白组、ICA(20 mg/kg)组,6-OHDA(8μg)组,6-OHDA+ICA(10 mg/kg)低剂量组,6-OHDA+ICA(20 mg/kg)高剂量组。造模提前一天灌胃给予ICA,大鼠造模后每天灌胃给予ICA连续14天。取材前一周通过转棒实验观察ICA对6-OHDA损伤大鼠行为学改变的改善作用;利用免疫组织化学染色法分别检测大鼠中脑黑质内DA能神经元的形态和数量的变化以及小胶质细胞激活的情况。(2)细胞实验:取怀孕14-15天的SD大鼠胚胎的中脑组织,无菌条件下建立神经元-胶质细胞共培养模型,实验随机分为空白组、ICA(0.1μM)组、6-OHDA(40μM)组、6-OHDA+ICA(0.01μM)低剂量组、6-OHDA+ICA(0.1μM)高剂量组。细胞给予ICA作用30 min后再给予6-OHDA。7天后,利用免疫细胞化学染色法分别检测共培养细胞中DA能神经元的形态和数量的变化及小胶质细胞激活的情况。Griess试剂检测共培养细胞上清液中NO含量,ELISA法检测TNF-α、IL-1β的含量。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测共培养中DA能神经元表面标记物酪氨酸羟化酶(Tyrosine hydroxylase,TH)和小胶质细胞表面特异性蛋白离子钙接头蛋白(Ionized calcium-binding adapter molecule-1,Iba1)以及核转录因子蛋白家族(NF-κB)中IκBα和p65蛋白的磷酸化水平。结果:(1)动物实验:6-OHDA组大鼠行为活动能力明显降低,DA能神经元数量减少,小胶质细胞激活增多;给予ICA后,大鼠行为活动能力得到明显改善,DA能神经元数量增加,小胶质细胞激活明显被抑制。(2)神经元-胶质细胞共培养实验:6-OHDA组的DA能神经元数量减少,胞体缩小,树突大量消失,活化的小胶质细胞增多,细胞上清液中TNF-α、IL-1β和NO的含量明显上升,NF-κB通路中的IκBα和p65蛋白的磷酸化水平升高;给予ICA处理后,ICA能够保护6-OHDA导致的DA能神经元损伤,抑制小胶质细胞的激活,使Iba1蛋白表达水平下降,细胞培养上清液中TNF-α、IL-1β和NO的含量减少,抑制了磷酸化IκBα和p65蛋白。结论:ICA能够保护6-OHDA诱导的DA能神经元损伤,其作用机制可能与抑制小胶质细胞介导的神经炎症反应有关
【学位授予单位】：遵义医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5
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