三七总皂苷对高氧诱导的新生小鼠视网膜病变LncRNAs的影响

发布时间：2020-07-27 21:08

【摘要】：目的观察三七总皂苷对高氧诱导的视网膜病变(Oxygen-induced retinopathy,OIR)新生小鼠视网膜新生血管及视网膜组织中长链非编码RNA(Long non-coding RNAs,lnc RNAs)的影响,探讨其可能的作用机制,为三七总皂苷治疗早产儿视网膜病变(Retinopathy of prematurity,ROP)提供相应的实验依据。方法采用经典的Smith造模法建立OIR新生小鼠模型。80只C57BL/6J新生小鼠,随机对照平均分为四组:A组(正常对照组)、B组(OIR组)、C组(三七总皂苷组)、D组(PBS组)。正常对照组在常氧环境中饲养直至出生后(Postnatal,P)第17天。P7至P11,B组、C组、D组都在75%的高氧浓度中饲养。P12,C组小鼠眼球玻璃体腔注射1μL三七总皂苷,D组小鼠眼球玻璃体腔注射1μL的PBS无菌溶液,此后一直在正常空气中饲养到P17。P17处死全部小鼠,取视网膜组织。心脏荧光灌注异硫氰酸荧光素葡聚糖(Fuorescein isothiocyanate,FITC-dextran)后视网膜铺片,观察各组视网膜血管的形态变化;HE染色计量突破视网膜内界膜新生血管内皮细胞核数;免疫组化检测VEGF的表达情况;反转录PCR(Reverse transcription-PCR,RT-PCR)检测Lnc RNA XLOC_150636、XLOC_150632、XLOC_122045、XLOC_122042、XLOC_100454、XLOC_170009的m RNA表达变化;Western blot检测VEGF,FGF2蛋白的表达变化。结果视网膜铺片显示,OIR组与正常对照组相比,可见视网膜形态异常,大量视网膜新生血管丛和无灌注区,视网膜血管明显增生弯曲。三七总皂苷治疗后视网膜血管弯曲增生明显减轻,无灌注区减少。PBS治疗后仍可见大量弯曲增生的血管丛。HE染色观察发现,OIR组和PBS组出现大量突破视网膜内界膜内皮细胞核,正常对照组和三七总皂苷组仅见少量突破视网膜内界膜内皮细胞核。免疫组化结果显示,正常对照组有少量VEGF的表达,OIR组和PBS组中VEGF的表达显著升高,三七总皂苷组的结果与正常对照组类似。RT-PCR检测XLOC_150636、XLOC_150632在OIR组中表达明显上调,在三七总皂苷组中显著下调,PBS组中无明显变化。XLOC_122045、XLOC_122042、XLOC_100454、XLOC_170009在OIR组中表达明显下调,在三七总皂苷组中显著上调,PBS组中与OIR组比较无明显改变。Western blot检测,正常对照组中有少量VEGF和FGF2蛋白表达,OIR组VEGF和FGF2的蛋白表达明显增加,三七总皂苷治疗后,VEGF和FGF2的蛋白表达明显减少,PBS治疗后VEGF和FGF2的蛋白表达水平仍明显增加。结论三七总皂苷可调节高氧诱导的新生小鼠视网膜病变Lnc RNAs的表达,抑制视网膜新生血管的增生。
【学位授予单位】：湖北民族学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5
【图文】：

注：A：正常对照组；B：OIR 组；C：三七总皂苷组；D：PBS 组图 2-1 每组视网膜组织铺片（40×）Figure 2-1 Retinas tissue flatmount of each group（40×）2.3.2 三七总皂苷对视网膜突破内界膜血管内皮细胞核数的影响为了进一步观察三七总皂苷对 OIR 新生小鼠视网膜内皮细胞核的影响，取眼球切片 HE 染色。结果如图（见图 2-2），图中箭头指向为突破视网膜内界膜内皮细胞核。可见，正常对照组视网膜组织结构布局整齐，未见突破内界膜的内皮细胞核，OIR 组视网膜组织边缘结构不齐，出现大量内皮细胞核突破视网膜内界膜进入玻璃体。与 OIR 组相比，三七总皂苷组的视网膜组织结构紊乱情况明显好转，只见少量突破的内皮细胞核，而 PBS 组的视网膜组织结构未见明显改善，仍可见大量的内皮细胞核突出。双盲法计算结果显示（见图 2-3）：OIR 组内皮细胞核的数量显著高于正常对

注：A：正常对照组；B：OIR 组；C：三七总皂苷组；D：PBS 组图 2-2 每组视网膜组织切片 HE 染色（200×）Figure 2-2 Retinal tissue sections HE staining of each group (200×)注：A：正常对照组；B：OIR 组；C：三七总皂苷组；D：PBS 组。*P<0.01，有统计学意义。图 2-3 每组视网膜突破内界膜血管内皮细胞核数Figure 2-3 The Number of vascular endothelial cells in inner limiting membrane of retinas

法检测视网膜血管内皮细胞标记物 VEGF 的表达情况（见图2-4），图中箭头指示为阳性表达。观察发现，高氧暴露下的小鼠与在正常室内空气饲养的小鼠相比，VEGF 在视网膜血管内皮细胞中表达显著上调,主要分布在内核层、内部网织层、神经节细胞层和神经纤维层，而这些部位同时伴随着新生血管的生成。与 OIR 组相比，三七总皂苷组 VEGF 的表达明显较少，相应的视网膜新生血管也减少，而 PBS 组无明显变化。表明 VEGF 表达水平降低与三七总皂苷的治疗相关。注：A：正常对照组；B：OIR 组；C：三七总皂苷组；D：PBS 组图 2-4 每组视网膜组织 VEGF 免疫组化（200×）Figure 2-4 VEGF immunohistochemistry in each group of retinal tissues(200×)2.3.4 三七总皂苷对视网膜组织 LncRNAs 表达的影响RT-PCR 检测四组新生小鼠视网膜组织中 LncRNA XLOC_150636、XLOC_150632、XLOC_122045、XLOC_122042、XLOC_100454、XLOC_170009的 mRNA 表达水平变化（见图 2-5）。分析显示，OIR 组与正常对照组相比，

【参考文献】

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本文编号：2772387