乳香-没药配伍有效部位制备及其体外抗肿瘤活性评价

发布时间：2020-07-28 10:18

【摘要】：第一章文献综述本章分别对乳香、没药及二者配伍效应成分群的现代研究进行了较为系统的归纳整理,并综述了乳香-没药配伍抗肿瘤活性的研究进展,为乳香-没药配伍抗肿瘤作用的深入研究和现代临床应用提供了基础和依据。第二章乳香、没药及其药对总萜部位的制备与分析本章采用超高效液相色谱-质谱联用(UPLC-TQ/MS)技术,对乳香、没药配伍前后萜类成分的溶出量进行分析与评价,以期从化学成分溶出的角度探讨乳香-没药配伍的合理性;对乳香-没药药对总萜部位的制备工艺进行优化,为后续实验样品的制备方法提供参考,结果如下:1.乳香、没药配伍前后萜类成分溶出量测定结果显示,10个萜类成分在单味药材中的总溶出量为2.02%,在配伍后总溶出量显著增加至3.40%。配伍后除松香酸的溶出量低于在没药单味药中的溶出量外,其余9个萜类成分的溶出量普遍增加,其中以3-乙酰基-11-酮基-β-乳香酸、β-乳香酸和乙酰11α-甲氧基-β-乳香酸的溶出量增加最为显著,与配伍前比较分别增加0.54%、0.33%和0.24%。2.制备工艺优化研究结果显示,乳香-没药药对中萜类成分的最佳提取工艺为95%的乙醇12倍量回流提取2 h,共2次,在此条件下萜类成分的总含量为1.70%。纯化工艺优化结果显示,萜类成分的最佳纯化工艺为:200-300目硅胶1:20上样,50:1的石油醚:乙酸乙酯2 BV除杂,4:1的石油醚:乙酸乙酯洗脱,收集第4-6 BV的洗脱液。在此条件下萜类成分总含量为26.60%。3.参照优化的提取、纯化工艺分别制备乳香、没药及其药对供试样品,并对各样品萜类成分的含量进行分析。结果显示,乳香醇提物、没药醇提物、药对醇提物、乳香水提物、没药水提物、药对水提物和药对总萜部位中萜类成分的总含量分别为8.84,11.34,17.00,0.36,1.02,0.69,266.11 mg·g~(-1),为后续实验供试样品提供了保障。第三章乳香、没药及其药对体外抗肿瘤活性评价与机制探讨本章围绕乳香-没药配伍的抗肿瘤活性,以多发性骨髓瘤为研究对象,以U266和RPMI8226多发性骨髓瘤细胞株为细胞模型,结合传统分子生物学和代谢组学技术探讨乳香、没药配伍对多发性骨髓瘤的抑制效应及作用机理,以期为乳香、没药的临床应用与开发提供科学依据。1.以U266和RPMI 8226多发性骨髓瘤细胞株为研究对象,对乳香醇提物、没药醇提物、乳香-没药药对醇提物、乳香-没药药对总萜部位及主要效应成分的抗多发性骨髓瘤功效进行评价。结果表明,3个提取物和药对总萜在浓度大于25μg·mL~(-1)时均能显著抑制U266和RPMI 8226细胞的增殖。在乳香、没药的效应成分中以3-O-乙酰-α-乳香酸、3-乙酰基-11-酮基-β-乳香酸和11-酮基-β-乳香酸的抗多发性骨髓瘤增殖效应最为显著。乳香-没药配伍的抗肿瘤作用机理可能与抑制细胞IL-6和VEGF的分泌及抑制JAK/STAT信号通路的激活相关。2.基于代谢组学方法探讨乳香、没药及其药对对U266细胞代谢轮廓的调节作用,借助UPLC-TOF/MS技术对内源性代谢产物进行分析鉴定。各供试样品均显著调节U266细胞的代谢轮廓;在乳香醇提物、没药醇提物、乳香-没药药对醇提物和药对总萜部位处理组细胞中分别鉴定出11,8,7,7个内源性代谢物及2,2,3,0条靶标通路,涉及维生素代谢、花生四烯酸代谢、氨基酸代谢和脂质代谢等代谢通路,说明乳香-没药配伍效应成分可能通过调节U266细胞代谢从而发挥体外抗肿瘤作用。第四章乳香、没药及其药对主要效应成分的体内吸收与代谢产物研究为进一步分析乳香-没药配伍对效应成分的体内吸收与代谢的影响,本章通过建立UPLC-TQ/MS和UHPLC-LTQ-Orbitrap-MS分析方法,对乳香、没药配伍前后3-乙酰基-11-酮基-β-乳香酸、11-酮基-β-乳香酸和2-甲氧基-8,12-环氧吉玛-1(10)-7,11-烯-6-酮的药代动力学特征及其代谢产物进行分析与评价,以此阐明乳香、没药配伍前后效应成分在体内的吸收和代谢机制,为进一步深入研究提供科学依据,结果如下:1.乳香、没药及其药对主要效应成分的药代动力学研究基于UPLC-TQ/MS技术比较分析乳香、没药及其药对给药后大鼠血清中3-乙酰基-11-酮基-β-乳香酸、11-酮基-β-乳香酸和2-甲氧基-8,12-环氧吉玛-1(10)-7,11-烯-6-酮的含量变化及药动学参数。结果显示,3-乙酰基-11-酮基-β-乳香酸、11-酮基-β-乳香酸和2-甲氧基-8,12-环氧吉玛-1(10)-7,11-烯-6-酮分别在2 h、2 h和15 min左右达到最高血药浓度,配伍后3个成分的AUC_(0-t)和t_(1/2)有不同程度的增加,同时CL/F显著降低,表明乳香-没药配伍改善了效应成分在大鼠体内的吸收。2.乳香、没药及其药对主要效应成分的体内代谢产物分析对3-乙酰基-11-酮基-β-乳香酸、11-酮基-β-乳香酸和2-甲氧基-8,12-环氧吉玛-1(10)-7,11-烯-6-酮在大鼠血浆中的代谢产物进行鉴定,并对其在乳香、没药配伍前后代谢产物的差异性进行分析。结果发现3-乙酰基-11-酮基-β-乳香酸、11-酮基-β-乳香酸和2-甲氧基-8,12-环氧吉玛-1(10)-7,11-烯-6-酮在大鼠体内存在多种I相和II相代谢产物,且配伍前后代谢产物有一定程度的差别,主要形式包括原型、还原、氧化、脱水、水解、脱乙酰基、脱烷基、羟化、乙酰化、葡萄糖醛酸化、氨基酸结合物等。
【学位授予单位】：江苏大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285;R283.6
【图文】：

乳香,化合物结构,代表性,甘遂

图 1-1-1 乳香中代表性乳香酸类化合物结构Figure 1-1-1 The structures of representative boswellic acid in frankincense1.1.2 四环三萜乳香中的四环三萜以甘遂烷型为最主要的结构形式，代表性成分为 3-羟基甘遂-8,24二烯-21-酸、3α-乙酰氧基甘遂-8,24-二烯-21-酸、3α-羟基甘遂-7,24-二烯-21-酸，化学结构见图 1-1-2。乳香中四环三萜的分离常采用硅胶柱层析，常用鉴定方法有薄层色谱法、质谱法和波谱法等。图 1-1-2 乳香中代表性四环三萜类化合物结构Figure 1-1-2 The structures of representative tetracyclic triterpenes in frankincense

乳香,四环三萜,代表性,甘遂

乳香,大环二萜,代表性

图 1-1-3 乳香中代表性大环二萜类化合物结构Figure 1-1-3 The structures of representative macrocyclic diterpenoids in frankincense1.2 药理作用通过对近十年文献进行检索，发现乳香具有显著的镇痛、抗肿瘤、抗凝血、抗溃疡、抗抑郁、抗炎和修复损伤等多种生物活性。乳香传统活血化瘀、消炎镇痛的功效物质基础为挥发油类和水提液，而醇提液虽然也具有一定的消炎作用，但有研究表明，乳香醇提液对小鼠耳廓肿胀程度的抑制效果显著低于水提液[8]（水提液组抑制率 82.66%，醇提液组47.15%），这也证实了传统名方如活络效灵丹以“水煎服”的合理性。对乳香现代药理作用的扩展除基于传统水提液外，还侧重于乳香酸类成分的研究，发现了如 KBA、AKBA 等具有抗炎、抗肿瘤等多种生物活性的化合物[9-10]。详细结果见表 1-1-1。表 1-1-1 乳香药理作用及物质基础Table 1-1-1 The pharmacology and material basis of frankincense药理作用模型物质基础作用机制参考文献镇痛醋酸诱导的小鼠模型挥发油尚不明确11醇提物本身无镇痛作用，但与挥发油协同增效

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