戒毒一号指纹图谱分析及其对甲基苯丙胺诱导的小鼠行为敏化的影响

发布时间：2020-07-30 09:03

【摘要】：目的:药物成瘾是指出于非医疗目的,连续、强迫性地使用具有依赖性药物的慢性复发性脑病。以甲基苯丙胺(methamphetamine,METH)为代表的新型毒品滥用趋势严重,危害人类健康,是我国禁毒事业面临的新难题与挑战。METH成瘾机制复杂,因此多靶点作用的中药复方更有希望成为治疗METH成瘾的潜在药物。本实验室通过前期实验筛选,制备了由中药延胡索、茯苓、党参等8味中药组成的戒毒一号(JieDuYiHao,JDYH),并进行了一系列质量控制和安全评价实验,保证戒毒一号的稳定性和安全性,同时通过考察中药复方戒毒一号对METH诱导的行为敏化的影响,评价戒毒一号在防治METH成瘾中的作用,为寻找高效无毒的抗METH成瘾的药物提供实验依据。方法:1.戒毒一号的制备。精密称量延胡索、茯苓、党参、甘草、白术、黄芪、西洋参、当归共94 g(出于保密目的,组方中各单味药含量暂不公开),浸泡于1400ml蒸馏水中30 min后,用中药煎煮机武火煎煮至沸腾后转为文火煎煮,药液煎煮至400 ml关火,滤出药渣,即得戒毒一号水煎剂。2.指纹图谱分析。采用高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)法,Thermo公司Ultimate TM XB-C18色谱柱,检测戒毒一号中延胡索甲素、延胡索乙素、小檗碱、甘草酸成分时以乙腈-水-磷酸缓冲液为流动相,体积流量为1.0mL/min,柱温30℃,检测波长为280 nm;检测戒毒一号中的人参皂苷Re、人参皂苷Rb1成分时以乙腈-纯水为流动相,体积流量为1.0 mL/min,柱温30℃,检测波长203 nm。分析获得的戒毒一号的高效液相指纹图谱,为戒毒一号的质量控制提供依据。3.急性毒性实验和长期毒性实验。开展戒毒一号的急性毒性实验和3个月长期毒性实验,观察戒毒一号对SD大鼠的体质量、饮食饮水、生化指标的影响,为临床安全用药提供依据。4.自发活动测试。分别测定C57BL/6小鼠单次灌胃戒毒一号、连续7天灌胃戒毒一号和灌胃7天后停药7天时小鼠的自发活动,观察戒毒一号是否影响小鼠自发活动和戒毒一号自身是否产生行为敏化。5.高活动性实验。观察戒毒一号对单次给予METH诱发小鼠自发活动升高的影响。6.行为敏化实验。采用反复间断给予METH处理建立METH行为敏化小鼠模型,分别在行为敏化的形成、转化和表达期给予戒毒一号干预,观察戒毒一号对METH行为敏化的影响。结果:1.高效液相色谱指纹图谱结果显示,戒毒一号中延胡索甲素含量为28.33μg/ml、延胡索乙素含量为27.66μg/ml,小檗碱含量为3.18μg/ml,测定实验结果专属性高、无阴性干扰。10批戒毒一号水煎剂中共有峰的相对保留时间偏差(Relativesandard deviation,RSD)小于1%。通过分析两种色谱条件下检测的叠加图谱,选定了19个峰为戒毒一号的特征峰,10批戒毒一号样品的平均相似度为0.988。2.急性毒性实验结果表明SD大鼠1天内3次灌胃戒毒一号(67.68 g·kg~(-1)),等同于60 kg成人临床拟用量的80倍,该剂量下没有出现毒性反应。长期毒性试验结果表明,与对照组相比,戒毒一号低、中、高剂量组(1.04 g/kg、5.21 g/kg、10.42 g/kg)SD大鼠灌胃90天时,停药14天时,大鼠体质量、饮食饮水、各阶段脏器指数均无异常;与对照组相比,灌胃90天后,大鼠的部分血液生化指标的检测结果具有统计学差异(P0.05),但均在SD大鼠血液生化指标正常范围内,停药14天后各指标均恢复正常。3.小鼠单次、多次灌胃戒毒一号(14.12 g/kg、56.48 g/kg)后,与对照组相比,戒毒一号给药组小鼠自发活动没有统计学差异(P0.05)。4.在戒毒一号对METH引起小鼠自发活动升高的影响实验中,单次腹腔注射METH(2 mg/kg)可使小鼠自发活动明显增加(P0.01);与模型组相比,戒毒一号低、高剂量组小鼠自发活动没有统计学差异(P0.05)。5.在行为敏化实验中,与模型组相比,在METH诱导的行为敏化各阶段给予戒毒一号(14.12 g/kg、56.48 g/kg)小鼠的自发活动均显著降低(P0.05或P0.01)。结论:1.从10批戒毒一号样品的高效液相指纹图谱可以看出,不同批次的戒毒一号各色谱峰的相对保留时间高度一致,所含成分基本相同,说明各批次戒毒一号具有很好的质量稳定性。2.戒毒一号在急性毒性试验和长期毒性试验中均无明显毒性,表明戒毒一号在临床拟用量范围内使用具有安全性。3.与对照组相比,戒毒一号低、高剂量组单次、多次给药小鼠自发活动均无显著差异,表明戒毒一号对小鼠自发活动无影响,且自身不产生行为敏化效应。4.单次灌胃戒毒一号低、高剂量均不能降低METH所致小鼠高活动性。5.戒毒一号低、高剂量组均能抑制METH诱导的行为敏化的形成、转化和表达,提示戒毒一号对METH的精神依赖具有治疗作用。
【学位授予单位】：江汉大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R286;R285.5;O657.72
【图文】：

化学式,右旋,构造式

江汉大学硕士研究生学位论文第 5页图1-1 多巴胺（DA）的化学式图1-2 甲基苯丙胺（METH）的化学式（左）和构造式（右）从图1.2 METH的构造式可以看出，METH分子中含有一个不对称的手性碳原子，具有旋光异构性，因而一个构造式对应左旋和右旋两种旋光方向相反的异构体，左旋的METH主要作用于医疗领域，多用作血管收缩药，属于拟交感神经药；右旋的METH是刺激中枢神经系统并产生成瘾性的管控药品[11]。等量的左旋和右旋METH混合物即是消旋的METH，同右旋METH一样同属于管控药物，均能够强效兴奋中枢，且右旋METH对中枢的刺激作用更强。METH消旋体易于获得，因此其使用率远高于右旋METH

构造式,甲基苯丙胺,化学式,右旋

指纹图谱,指纹图谱,药材,样品

江汉大学硕士研究生学位论文第 26页有峰在对应的药材具有明显的归属感，其中 9-17 号峰与延胡索药材有明显的归属性，其中 11、13、15 号峰是延胡索药材中的有效成分延胡索甲素、延胡索乙素、小檗碱，1-5 号峰为党参药材的归属峰，4-8、18 号峰是甘草药材的归属峰，其中 18 号峰是甘草中的有效成分甘草酸。

【参考文献】