西瑞香素抗炎及转运机制的研究

发布时间：2020-07-30 10:03

【摘要】：背景:关节炎是一种发生在人关节及周围组织的炎症,引起关节炎的因素有很多,可能是炎症、感染、创伤等等。关节炎表现为关节红肿,热,痛。据统计我国50岁以上人群中关节炎的患病率在50%以上,关节炎对患者正常生活有着极大的影响,严重者生活不能自理,导致关节残疾等。西瑞香素(Daphnoretin),化学名7-羟基-6-甲氧基-3,7'-双香豆素酯,又名了哥王素,在众多豆科、芸香科和瑞香科的植物中有较丰富的含量,经提取纯化工艺后可得西瑞香素。在传统医学中使用含有西瑞香素的了哥王、祖师麻等药材治疗关节炎等炎症。另据文献报道,西瑞香素还具有抗肿瘤、镇痛、抗菌、抗焦虑、抗病毒等功效,故本课题将西瑞香素作为主要研究对象,以提高西瑞香素实用性。目的:通过THP-1细胞炎症模型的药效实验、ELISA实验检测各细胞因子受西瑞香素的影响,来验证西瑞香素的抗炎效果。建立Caco-2细胞的Tanswell模拟小肠转运模型,通过比较西瑞香素在能量抑制剂、转运蛋白抑制剂的存在下西瑞香素在Tanswell模拟小肠转运模型中的吸收情况,研究西瑞香素在人体肠道中的吸收机制,来为以后西瑞香素药代动力学和临床应用提供理论基础。方法:第一部分抗炎实验中,实验采用了CCK-8法检测不同浓度的西瑞香素对THP-1细胞活性的影响,并通过ELISA实验检测经LPS(脂多糖)诱导后THP-1细胞炎症模型分泌的各细胞因子的水平,和经西瑞香素处理后对细胞因子分泌量的影响,来验证西瑞香素对炎症细胞的作用。第二部分转运机制研究中,使用经典的MTT法检测西瑞香素对Caco-2细胞的毒性,来决定实验中西瑞香素的浓度区间。采用Caco-2(结肠腺癌细胞)建立Transwell转运细胞模型,使用细胞电阻仪检测单细胞膜的生长程度,并通过检测细胞分泌的AKP(碱性磷酸酶)的浓度来观察Caco-2单细胞膜分化的程度,通过酚红实验来验证细胞单层膜的完整性。利用建立的Caco-2细胞的Tanswell模拟小肠转运模型,结合能量抑制剂和转运蛋白抑制剂,通过HPLC(高效液相)法检测Transwell转运细胞模型的上下室中的西瑞香素的含量,来研究西瑞香素通过人体小肠上皮细胞吸收的转运机制。结果:CCK-8法检测不同浓度的西瑞香素对THP-1细胞活性的影响,实验结果表明在西瑞香素浓度高于10μg/ml时可以明显的抑制TNF-α炎症因子的分泌(P0.05),在浓度高于1μg/ml时可以明显的抑制MCP-1,IL-1β炎症因子的分泌(P0.05),50μg/ml、20μg/ml、10μg/ml三种浓度的西瑞香素对IL-6炎症因子的分泌有影响,分泌水平明显受到西瑞香素浓度的影响P值均小于0.05,但作用时间为12h西瑞香素浓度是10μg/ml的一组对比LPS组并没有显著性。采用MTT法测定西瑞香素对Caco-2的细胞毒性,结果表明西瑞香素溶液浓度在20μg/ml以下时对Caco-2细胞毒性可以忽略不计。在建立Caco-2细胞转运模型并验证模型可靠性后,实验通过加入不同转运蛋白抑制剂来研究西瑞香素的转运机制,实验结果表明加入能量抑制剂后西瑞香素在模型中的转运AP-BL和BL-AP均受到显著影响(P0.05)表明西瑞香素的转运是一种能量依赖性的过程。加入P-gp蛋白抑制剂后西瑞香素转运没有受到显著性的影响(P0.05),表明P-gp蛋白并未参与西瑞香素的转运过程。加入MRP2蛋白抑制剂后,西瑞香素AP-BL的Papp提高了7.1%,BL-AP方向并没有受到显著性影响,此处提示西瑞香素的转运过程中可能有MRP2蛋白的参与。加入BCRP蛋白抑制剂后AP-BL方向转运与西瑞香素组并没有显著性差异(P0.05),但BL-AP方向转运的表观渗透系数较西瑞香素组降低了23.8%,且PAB/PBA为0.75说明西瑞香素转运过程中有BCRP蛋白的参加。结论:实验发现西瑞香素对细胞分泌炎症因子具有较强的抑制作用,但对THP-1细胞活力和细胞形态没有较大影响,本实验建立Caco-2细胞Transwell模型可用于研究西瑞香素在人体细胞中的吸收分布代谢,为西瑞香素的下一步研究打下了坚实基础。
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285
【图文】：

；西瑞香素以线粒体介导的方式促进 Hela 细胞能成为治疗子宫颈癌的药物；张玉静研究了西作用和西瑞香素对细胞凋亡的诱导作用以及对过建立西瑞香素的 HPLC 检测方法测定了不同[38]；研究发现西瑞香素对破骨细胞的分化有抑促进作用[39]。根据以上研究成果可以发现，西掘出来，表明其药用价值仍有待进一步的研究。及意义究了西瑞香素在 LPS（脂多糖）诱导的 THP-1效学，通过考察炎症细胞分泌的各项细胞因子果。之后在此基础上通过 Transwell 细胞吸收转吸收情况下的吸收机制，通过研究药物的吸收制和解决药物的实际运用中出现的各项问题提物的代谢动力学做铺垫。

著差异（P>0.05）。如图 3 所示西瑞香素+LPS 组对比空白组明显下降（P<0.05），西瑞香素+LPS 组对比 LPS 细胞活力无明显差异（P<0.05）。图 2 不同浓度西瑞香素对 THP-1 细胞活力的影响

第一章 THP-1 细胞炎症模型中西瑞香素的抗炎效果（P<0.05）。西瑞香素各浓度组对比空白组细胞活力相差不大，经数据分析无显著差异（P>0.05）。如图 3 所示西瑞香素+LPS 组对比空白组明显下降（P<0.05）西瑞香素+LPS 组对比 LPS 细胞活力无明显差异（P<0.05）。

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本文编号：2775385