青钱柳总黄酮对3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗作用及机制研究

发布时间：2020-07-30 10:47

【摘要】：目的:研究青钱柳总黄酮对3T3-L1前脂肪细胞增殖、分化和胰岛素抵抗(Insulin resistance,IR)脂肪细胞葡萄糖的消耗、游离脂肪酸(Free fatty acids,FFA)产生的影响,以及对3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗的改善作用;研究青钱柳总黄酮对胰岛素受体底物-1(IRS-1)mRNA、葡萄糖转运蛋白4(Glut-4)mRNA及过氧化物酶体激活受体γ(PPARγ)mRNA表达的影响,探究其可能的作用机制。方法:1.体外常规培养3T3-L1前脂肪细胞,并设空白组(完全培养基)、溶媒对照组(1‰DMSO)、阳性药物组(二甲双胍Metformin,Met,2μg/mL)、青钱柳药物处理组(1‰DMSO,完全培养基)各组药物均处理相应时间后,采用MTT法检测不同处理药物组对3T3-L1前脂肪细胞增殖的影响。培养前脂肪细胞并诱导其分化,诱导分化六天后,并设空白组、溶媒对照组、阳性药物组、青钱柳药物处理组,分组给药处理48 h,采用油红O染色法观察药物对细胞分化的影响。2.取诱导分化成熟的脂肪细胞用地塞米松(Dexamthason,Dex)作用96 h建立IR模型,设空白组和模型组(Dex,1μg/mL),检测造模是否成功。在模型基础上,设空白组、溶媒对照组、阳性药物组、青钱柳药物处理组,分组给药48 h后收集细胞上清液,用葡萄糖氧化酶-过氧化氢酶法(GOD-POD)检测IR脂肪细胞上清液葡萄糖消耗量,用比色法检测上清液中游离脂肪酸的变化。3.取造模成功的细胞,设模型组、阳性药物组、青钱柳药物处理组,各组药物处理后,提取细胞中的总mRNA,用qRT-PCR检测胰岛素抵抗脂肪细胞中Glut4 mRNA、IRS-1 mRNA及PPARγm RNA的表达量。结果:1.青钱柳总黄酮对3T3-L1前脂肪细胞增殖分化的影响与溶媒组比较,二甲双胍(Met)和青钱柳总黄酮能显著促进3T3-L1前脂肪细胞的增殖与分化(P0.01),并且青钱柳总黄酮有剂量依赖性,在64μg/mL剂量下增殖分化效果最佳。2.青钱柳总黄酮对IR脂肪细胞葡萄糖消耗和FFA产生的影响与空白组比较,模型组葡萄糖消耗明显降低,统计分析有显示差异(P0.05),提示造模成功。与空白组比较,IR溶媒组葡萄糖消耗显著下降(P0.05);其他各组与IR溶媒组比较,Met和青钱柳总黄酮能显著促进IR脂肪细胞葡萄糖消耗(P0.01)。与空白组比较,IR溶媒组对FFA的产生抑制率显著下降(P0.01);其他各组与IR溶媒组比较,Met和青钱柳总黄酮显著抑制了IR脂肪细胞FFA的产生(P0.01)。3.青钱柳总黄酮对IR脂肪细胞PPARγmRNA、Glut4 mRNA、IRS-1 mRNA、表达量的影响与IR模型组比较,Met和青钱柳总黄酮显著上调了IR脂肪细胞PPARγmRNA的表达(P0.01);Met显著上调了IR脂肪细胞Glut4 mRNA、IRS-1 mRNA的表达(P0.01),青钱柳总黄酮对其表达无统计学意义。结论:1.青钱柳总黄酮能显著促进3T3-L1前脂肪细胞的增殖分化;能够显著促进3T3-L1胰岛素抵抗脂肪细胞葡萄糖的消耗并抑制其FFA产生,可通过改善糖脂代谢作用来改善IR的作用。2.青钱柳总黄酮改善胰岛素抵抗作用机制可能是通过上调PPARγmRNA的表达来实现的。
【学位授予单位】：湖南中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5
【图文】：

采用 SPSS 19.0 软件进行统计分析，多yANOVE），两组比较采用 t 检验。肪细胞培养、诱导分化及鉴定肪细胞在胎牛血清的 DMEM 高糖培养基中生长状传代一次，细胞活性状态好，显微镜下可见细胞胞在用诱导液分化成脂肪细胞的过程中，细胞形浆内可见小脂肪滴，随着诱导分化进行胞浆内的导分化至第 10 天左右细胞分化成熟。脂肪组织中我们选择用油红 O 染料给分化成熟的脂肪细下可见胞浆内有红色脂滴。见图 1。

组别 浓度（ μg/mL）增殖率%24 h 48 h 72 h溶媒对照组 1 ‰DMSO 0.40±0.02 0.80±0.02 2.00±0.15总黄酮组（ μg/mL）1 1.35±0.07 1.56±0.08 4.66±0.202 1.68±0.06 2.15±0.08 5.18±0.094 2.30±0.29 5.35±0.25 7.80±0.098 7.45±0.18△5.90±0.26 11.85±0.13#16 10.06±0.25△16.97±1.08▲16.67±0.22##32 13.05±0.11△△35.10±1.55▲▲30.34±0.54##64 7.04±0.25△39.96±1.93▲▲31.04±0.70##128 3.56±0.39 23.47±0.34▲▲18.40±0.21##阳性药物组 2 22.00±0.36△△24.21±0.05▲▲18.76±0.08##注：与溶媒对照组比较，△p<0.05，△△p<0.01；▲p<0.05，▲▲p<0.01；#p<0.05，##p<0.01

钱柳总黄酮对 3T3-L1 前脂肪细胞分化的影响（水平的提高及生活方式的改变，人口老龄发病率呈上升的趋势[51]。2010 年中国糖尿患病率高达 11.60 %，患病人数居全球首位胖者合并糖尿病的发病率高达 18.50 %[52]。

【参考文献】

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本文编号：2775434