三七总皂苷对氧诱导小鼠视网膜新生血管作用的实验研究

发布时间：2020-08-01 07:16

【摘要】：目的通过观察三七总皂苷对氧诱导小鼠视网膜新生血管及视网膜组织中血管内皮生长因子A(VEGF-A)、血管生成素2(Ang2)、碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)和丝氨酸/苏氨酸激酶(Akt)表达的影响,探索三七总皂苷对氧诱导小鼠视网膜新生血管的可能作用机制,为以后中医药治疗早产儿视网膜病变(ROP)提供新的思路和实验依据。方法采用国际通用的Smith造模方法建立氧诱导视网膜病变(OIR)模型。将60只C57BL/6J新生小鼠随机分为四组,分别为A组(正常对照组),B组(三七总皂苷组),C组(雷珠单抗组),D组(OIR组)。正常对照组在正常空气环境中饲养至出生后(P)第17天,其他三组新生小鼠于P7-P11在高浓度氧气环境中饲养。P12,B组小鼠眼球玻璃体腔注射1μL三七总皂苷,C组小鼠眼球玻璃体腔注射1μL雷珠单抗。P17处死所有小鼠,取视网膜组织进行HE染色,计数突出内界膜的新生血管内皮细胞核数;心脏荧光灌注与视网膜铺片观察各组视网膜新生血管的生长形态;免疫组织化学染色法检测各组视网膜VEGF的阳性表达,反转录PCR(RT-PCR)检测VEGF-A,Ang2,b FGF,PI3K和Akt的m RNA表达,Western blot检测VEGF-A和PI3K蛋白的表达。结果HE染色结果可见三七总皂苷组有少量突出内界膜的新生血管内皮细胞核,OIR组有大量突出内界膜的新生血管内皮细胞核。视网膜铺片观察发现,OIR组视网膜血管扭曲扩张现象严重,无灌注区增多,三七总皂苷组和雷珠单抗组血管扭曲扩张现象明显减轻,无灌注区少。免疫组化结果可见OIR组与正常对照组相比,VEGF的表达显著增高,三七总皂苷组和雷珠单抗组有少量VEGF的表达。RT-PCR检测VEGF-A,Ang2,b FGF,PI3K和Akt在OIR组中表达上调,在三七总皂苷组和雷珠单抗组中表达明显下调。Western blot检测结果显示,正常对照组有少量VEGF-A和PI3K蛋白的表达,OIR组VEGF-A和PI3K蛋白表达显著增加,三七总皂苷组和雷珠单抗组VEGF-A和PI3K蛋白表达降低。结论三七总皂苷可通过调节VEGF-A,Ang2,b FGF,PI3K和Akt的表达,抑制氧诱导小鼠视网膜新生血管的形成。
【学位授予单位】：湖北民族大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5
【图文】：

2.3 实验结果2.3.1 视网膜铺片结果将四组新生小鼠心脏灌注 FITC 后观察视网膜血管形态变化（如图 2-1）发现，正常对照组浅表血管从视盘开始向心生长，大致到达远端周围，视网膜血管呈放射状走行，多边形结构清晰，无新生血管丛，提示我们的心脏荧光灌注成功，铺片视网膜较为完整。OIR 组在中周部可见大量新生血管并伴有大量荧光渗漏，血管结构异常，高度畸形，深浅层血管结构不清，血管分支复杂且不规则，提示造模模型成功。雷珠单抗组和三七总皂苷组铺片差异较小，均可见少量无血管区，血管迂曲程度减轻，走行变直，血管结构较为清晰，提示注射三七总皂苷可以抑制 OIR 新生小鼠新生血管的形成，注射雷珠单抗同样可以抑制 OIR 新生小鼠新生血管的形成。

2.3.2 视网膜 HE 染色结果取四组新生小鼠眼球，视网膜切片后 HE 染色（如图 2-2）。黑色箭头指向为突破视网膜内界膜的内皮细胞核。观察发现正常对照组切片结构清晰完整，未见任何眼部病理变化。OIR 组发现有大量细胞核延伸至视网膜内界膜，大都成簇出现，部分细胞核形成管腔，此外，视网膜有大量的新生血管簇，从视网膜内界膜延伸到玻璃体。三七总皂苷组和雷珠单抗组切片结构完整，光学显微镜下观察只有少量突破内界膜的内皮细胞核。通过定量评估突破视网膜内界膜的血管细胞核数量发现，三七总皂苷组和雷珠单抗组，突破视网膜内界膜的细胞核平均数量相较于 OIR 组明显减少。双盲法统计结果显示（如图 2-3）：正常组细胞核个数低于 OIR 组（P＜0.05），雷珠单抗组细胞核个数低于 OIR 组（P＜0.05），三七总皂苷组细胞核个数低于OIR 组（P＜0.05），差异有统计学意义。三七总皂苷组与雷珠单抗组结果相似，无统计学差异。

注：与正常对照组相比，#P<0.05；与 OIR 组相比，*P<0.0图 2-3 每组视网膜突破内界膜血管内皮细胞核数3 The Number of vascular endothelial cells in inner limiting membranF 免疫组织化学结果疫组化法观察视网膜切片中内界膜上的 VEGF 阳性表达（头指示为 VEGF 的阳性表达。正常对照组仅在神经节细测到 VEGF 阳性表达。OIR 组在神经节细胞层，内丛状层F 的阳性表达。观察发现 OIR 组的 VEGF 阳性表达量明面各层次结构紊乱，提示高氧促使视网膜新生血管的增生 VEGF 阳性表达明显低于 OIR 组，提示三七总皂苷能够血管。雷珠单抗组 VEGF 的阳性表达与三七总皂苷组相玻璃体腔注射三七总皂苷可以抑制 OIR 新生小鼠血管的

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本文编号：2777146