龙胆酒制前后化学成分和药效学差异研究

发布时间：2020-08-04 08:24

【摘要】：目的:采用水提醇沉法、高效液相色谱法对龙胆酒制前后的粗多糖含量和精多糖中单糖组成进行研究;采用Elisa法对龙胆酒制前后的药性差异,以及对大鼠保肝和抗黄疸作用的药效学差异进行研究,从化学成分和药效学差异方面初步探讨其酒制机理。材料与方法:材料:采挖辽宁省清原县龙胆种植基地的龙胆药材,经辽宁中医药大学中药鉴定教研室李峰教授鉴定为龙胆科植物龙胆(Gentiana scabra Bge.)的根茎。收集23个地区市售龙胆饮片,按照2015版《中国药典》收录的方法进行酒制,得到相应的酒龙胆。方法:1.采用水提醇沉法对23个不同地区收集所得龙胆饮片及对应炮制品进行处理,获得龙胆粗多糖,采用苯酚-浓硫酸使龙胆粗多糖显色后,再采用紫外-分光光度计外标一点法测得不同来源的龙胆及其酒制品中粗多糖的含量。2.采用Sevage法对水提醇沉所得粗多糖进行沉蛋白处理,得到龙胆精多糖,经三氟乙酸水解后,采用HPLC-ELSD法检测其中单糖种类,比较酒制前后多糖中单糖组成以及含量的差异变化。3.对SD大鼠分别灌胃酒制前后的高低剂量龙胆水提液,记录宏观体征(体质量和肛温),Elisa试剂盒检测大鼠的血浆物质代谢(乳酸LA、丙酮酸PA和甘油三酯TG)、肝组织能量代谢(Na~+-K~+-ATP酶、Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶)、胃粘膜激素水平(胃动素MTL、胃泌素GAS、前列腺素E_2)的异同,明确龙胆酒制前后苦寒之性的差异。4.分别灌胃酒制前后的高中低剂量龙胆水提液,采用腹腔注射四氯化碳法复制大鼠急性肝损伤模型,Elisa试剂盒检测大鼠血浆ALT、AST、TNF-α、MCP-1、IL-6以及肝组织SOD、MDA、GSH、GSH-Px的含量,HE染色法镜下观察各组大鼠肝病变程度。5.大鼠在湿热环境下高脂肪饮食,期间预防性灌胃酒制前后的高中低剂量龙胆水提液后,灌胃ANIT油溶液诱导黄疸模型,Elisa试剂盒检测大鼠血浆ALT、AST、ALP、TBIL、D-BiL、TBA以及肝组织MDA、GSTs的含量。荧光定量PCR法测定NTCP、BSEP、MRP2和MRP3的基因表达水平。结果:1.23个不同来源的龙胆多糖含量在1.50%~3.31%之间,经酒制后龙胆多糖含量在2.29%~4.88%之间。2.生龙胆总多糖中单糖的组成为Glc、Fru和Gal,其摩尔比为Glc:Fru:Gal=4.04:0.43:1;酒制后精多糖中各单糖组成未发生变化,但其含量以及摩尔比有所变化,摩尔比为Glc:Fru:Gal=4.32:1.19:1。3.灌胃生龙胆后,大鼠宏观体征下降、物质能量代谢减缓、胃粘膜受到刺激,其中体质量、肛温、血浆中LA、PA、肝组织中Na~+-K~+-ATP酶、Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶、胃粘膜中PEG_2和MTL等药效学指标下降,血浆中TG含量、胃粘膜中GAS含量上升。酒龙胆对这10种指标的改变具有显著的回调作用。4.生龙胆、酒龙胆均能明显降低由四氯化碳导致的急性肝损伤大鼠体内ALT、AST、TNF-α、MCP-1、IL-6、MDA含量,酒龙胆组大鼠TNF-α、MCP-1、IL-6含量比生龙胆组大鼠下降更为显著。生龙胆、酒龙胆均能明显提高SOD、GSH、GSH-Px含量,生龙胆组大鼠GSH、GSH-Px含量较酒龙胆组上升更为显著。5.生龙胆、酒龙胆均能明显降低黄疸型肝炎大鼠体内ALT、AST、MDA、ALP、TBIL、D-BiL、TBA、GSTs含量,且在对MDA和ALP的调控上,酒龙胆的效果明显优于生龙胆。黄疸型肝炎大鼠的NTCP、BSEP和MRP2的基因表达水平显著下降,而MRP3的基因表达水平显著上升,生龙胆和酒龙胆均有显著的回调作用,且酒龙胆的效果更好。结论:1.龙胆经酒制后,其多糖含量有不同不同程度的上升。龙胆精多糖水解后,其单糖组成为葡萄糖、果糖和半乳糖,酒制后组成成分无变化,但是含量有所改变,其中果糖含量显著上升。2.酒制可使龙胆苦寒之性下降,改善其对大鼠生长、物质代谢和能量代谢的抑制作用,以及减轻其对大鼠胃粘膜的刺激作用。生龙胆、酒龙胆对腹腔注射CCl_4油溶液所致的大鼠急性肝损伤均有一定保护作用,其中生龙胆提升肝组织的抗氧化作用较强,酒龙胆消除炎症因子、减轻炎症反应的作用较强。生龙胆、酒龙胆对灌胃ANIT油溶液所致的大鼠黄疸均有一定消除作用,且具备明显量效关系,酒龙胆的药效优于生龙胆。3.化学成分变化与药效变化的可能具备一定相关性,即酒制后多糖含量和单糖组成的改变可能是引起酒龙胆苦寒之性下降、保肝和消除黄疸作用增强的物质基础之一。
【学位授予单位】：辽宁中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R283
【图文】：

标准曲线,葡萄糖,标准曲线,吸光度

图 1-1-1 葡萄糖标准曲线2.4.2 稳定性试验精密吸取辽宁新宾生龙胆粗多糖溶液 6 份，按 2.4 项下方法加入苯酚-浓硫酸后的 5，10，15，20，25，30 min 分别测定吸光度。结果发现，6 份供试品溶液吸光度无明显变化，RSD 为 1.11%。见表 1-1-1。

标准曲线,混合标准,龙胆,水解液

-1a：混合标准品

龙胆,体质量,大鼠,空白

29图 2-1 龙胆酒制前后对大鼠体质量增长的影响注：#代表与空白组比较，P <0.05；##代表与空白组比较，P <0.01；△代表与同剂量生品组比较，P

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