枸杞多糖对酒精性肝损伤的保护作用及机制研究

发布时间：2020-08-04 15:49

【摘要】：目的:本文通过动物实验和细胞实验研究枸杞多糖(LBP)对酒精性肝损伤的预防和修复作用及其抗氧化机制,为LBP的高值化利用提供实验及理论依据。方法:1.LBP对小鼠酒精性肝损伤保护作用的研究。将小鼠随机分为8组,分别为对照组、模型组、LBP低剂量组、LBP中剂量组、LBP高剂量组及阳性对照低剂量组、阳性对照中剂量组和阳性对照高剂量组,建立LBP保护酒精性肝损伤动物模型,检测小鼠肝脏指标及血清转氨酶含量。2.LBP对酒精性肝细胞损伤预防及修复作用的机制研究。(1)培养L-02细胞,采用MTT法筛选乙醇和LBP的作用浓度及时间,建立酒精性肝细胞损伤模型。将肝细胞随机分为6组,分别为正常对照组、模型组、阳性对照+乙醇预防组、LBP+乙醇预防组、乙醇+阳性对照修复组、乙醇+LBP修复组。(2)用流式细胞法检测LBP对细胞凋亡的影响,激光共聚焦显微镜及荧光分光光度法检测细胞内ROS水平;化学法检测细胞中AST、ALT和GSH含量、MDA水平,SOD活性和GSH-Px活性,抗O_2~-·能力及NO含量。(3)Western blot法检测细胞中胞浆胞核Nrf2的表达及总蛋白中HO-1、NQO1、GCLC的表达。结果:1.阳性对照中剂量组及高剂量组、LBP低剂量组及中剂量组均可显著降低小鼠酒精性肝损伤的肝脏指数,LBP高剂量组及阳性对照低剂量组小鼠肝脏指数与模型组比较无统计学意义(P0.05)。LBP各剂量组均可显著降低酒精性肝损伤小鼠血清ALT含量,其中LBP低剂量组及中剂量组血清AST含量也降低;与模型组相比,阳性对照各剂量组均可显著降低小鼠血清中ALT含量,其中阳性对照低剂量组和中剂量组血清AST含量也降低。2.(1)建立酒精损伤L-02细胞模型并优选出LBP对酒精性肝细胞损伤预防和修复浓度及时间。最终以终浓度为5%(V/V)的无水乙醇损伤4h建立酒精损伤肝细胞模型,质量浓度为24μg/mL的LBP干预24h为干预条件。(2)LBP的预防和修复作用可以减少酒精损伤L-02细胞后的细胞凋亡率。与正常对照组对比,模型组中细胞早期+晚期凋亡率显著增加(P0.05);与模型组相比,LBP预防及修复组中细胞凋亡率降低(P0.05)。与正常对照组比较,模型组细胞中SOD、GSH-Px活性及抗O_2~-·能力降低且GSH生成量明显减少(P0.05),细胞中MDA水平及NO含量升高(P0.05);与模型组比较,LBP预防组及修复组中细胞的GSH-Px活性升高且GSH生成量增加,MDA及NO含量均降低(P0.05),其中修复组中细胞的SOD活性及抗O_2~-·能力增强。预防组中细胞SOD活性及抗O_2~-·能力与模型组相比无统计学意义(P0.05)。(3)与正常对照组相比,模型组肝细胞胞核中Nrf2蛋白表达水平及其下游的抗氧化蛋白HO-1、NQO1和GCLC的表达量均显著降低(P0.05),但LBP干预可增加Nrf2蛋白的入核表达,明显上调胞核中Nrf2蛋白及其下游蛋白HO-1、NQO1和GCLC的表达量(P0.05)。结论:LBP对小鼠酒精性肝损伤具有一定的保护作用。其机制与调控Nrf2/HO-1信号通路、清除活性氧自由基和活性氮的水平以及抗凋亡有关。
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5
【图文】：

学位论文 枸杞多糖对酒精性肝损伤表 2-1 LBP 对酒精性肝损伤肝脏指数的影响（x Table 2-1 Effect of LBP on liver index of alcoholic liver i 剂量(g/kg) 动物数（只） 肝组 10 组 7 低剂量组 0.05 10 中剂量组 0.1 11 高剂量组 0.3 11 剂量组 0.06 11 剂量组 0.12 11 剂量组 0.36 11 比较：##P<0.01; 与模型组比较：*P<0.05，**P<0.01，***P

学位论文 枸杞多糖对酒精性肝损伤的保护作表 2-2 LBP 对酒精性肝损伤转氨酶含量的影响（x ±s）le 2-2 Effect of LBP on transaminase content in alcoholic liver injury 剂量(g /kg) 动物数（只） ALT（U.L-1） 10 82.5±28.5 7 538.9±203.0##剂量组 0.05 10 328.2±91.5*剂量组 0.1 11 276.6±76.0***剂量组 0.3 11 309.4±73.0***量组 0.06 11 289.6±79.0***量组 0.12 11 311.0±61.9***量组 0.36 11 336.6±66.5**比较:##P<0.01,###P<0.005; 与模型组比较:*P<0.05,**P<0.01，***P<0.005

ANOVA）分析；若方差不齐，采用秩和检（x ±s）的形式表示。检验水准 α=0.05，与模计学意义。与对照组相比，#P<0.05，##P<0.1 软件绘图。伤的模型建立度筛选终浓度为 2%、3%、4%、5%、6%（V/V）力的变化。结果如图 3-1 显示，经不同浓度显著的低于对照组（P<0.05）。与此同时，降低，为保证在实验后期中细胞数量足够，V/V）对肝细胞损伤，此时细胞活力为（60

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本文编号：2780758