雷公藤甲素抑制转化生长因子-β诱导人Tenon囊成纤维细胞介导的胶原凝胶收缩的实验研究

发布时间：2020-08-04 16:20

【摘要】：目的:青光眼是世界第二致盲眼病,滤过性手术现今仍是临床上治疗青光眼主要的手术方式。而滤过泡瘢痕形成是青光眼滤过性手术失败的主要原因,其病理改变主要是由于Tenon囊和球结膜之间成纤维细胞增生、胶原合成增加,导致结膜下组织纤维化及其瘢痕收缩。研究显示,转化生长因子(TGF)-β在青光眼术后滤过泡瘢痕形成中起着重要作用。雷公藤甲素(Triptolide,TP)是我国传统中药雷公藤的有效成分,具有多种药理作用包括抗炎、免疫调节和抑制细胞增殖等。本研究探讨雷公藤甲素对转化生长因子(TGF)-β诱导人Tennon囊成纤维细胞(HTFs)收缩及产生细胞外基质(ECM)的影响。方法:Ⅰ型胶原三维凝胶培养人Tenon囊成纤维细胞,TGF-β及雷公藤甲素进行干预培养。通过测量三维凝胶的直径来评估Tenon囊成纤维细胞的收缩变化;收集三维凝胶培养的Tenon囊成纤维细胞,通过免疫印迹法(Western blot)检测肌球蛋白轻链磷酸化(MLC)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的变化并收集上清,通过ELISA法检测细胞外基质纤维粘连蛋白(FN)的产生。结果:雷公藤甲素抑制TGF-β诱导的由Tenon囊成纤维细胞介导的Ⅰ型胶原三维凝胶的收缩,并呈现时间及计量依赖性。雷公藤甲素抑制了TGF-β诱导的三维凝胶培养的Tenon囊成纤维细胞内MLC磷酸化,而对细胞内α-SMA表达没有影响。此外,雷公藤甲素还抑制了细胞外基质FN的产生。实验浓度下的TP对细胞没有毒性。结论:本研究显示雷公藤有效成分雷公藤甲素(TP)能抑制Tenon囊成纤维细胞的收缩,其机制可能涉及对细胞内MLC磷酸化的抑制;此外雷公藤甲素还抑制了细胞外基质的产生。因此,雷公藤甲素可能通过影响细胞外基质的重塑而抑制青光眼滤过术后滤过道处结膜组织的瘢痕形成。
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285
【图文】：

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TP 对未添加 TGF-β 的三维凝胶收缩没有明显作用（○）。图 4.1B 为人 Tenon 囊成纤维细胞的介导的三位凝胶收缩三天时的实物照。图4.1 不同浓度的TP 对三维凝胶培养人Tenon囊成纤维细胞收缩的影响○ 表示 None+TP ● 表示 TGF-β+TP

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图 4.2 TP 对三维凝胶培养人Tenon囊成纤维细胞收缩的影○表示 None+TGF-β ●表示 TGF-β+TP.3 TP 对三维凝胶培养的人 Tenon 囊成纤维细胞的毒将 4.1.1 中收集的培养上清用于细胞毒性检测。结果显示本实验 TP 对三维凝胶培养的人 Tenon 囊成纤维细胞无毒性作用；照（图 4.3）。

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赖作用胶培养人 Tenon 囊成纤维细胞分为对照组（无 TP /L 浓度 TP），添加 1 ng/ml TGF-β 后培养三天，每天胶原凝胶收缩程度。实验结果显示：添加 TGF-β 可纤维细胞介导的三维凝胶的收缩（○），这种作用随时nmol/L 浓度 TP 培养后， TP 可明显抑制 TGF-β 所诱，这种抑制作用在 2 天时具有统计学意义，其抑制作.2）。

【参考文献】