姜黄素调节自噬改善高糖诱导的腹膜纤维化

发布时间：2020-08-04 17:08

【摘要】：目的:腹膜透析中,葡萄糖仍是腹膜透析液中标准的、应用最广泛的渗透剂。腹膜若长期暴露在含高糖的腹膜透析液中,可致腹膜结构和功能紊乱,引起腹膜纤维化、超滤衰竭,是尿毒症患者退出腹膜透析的重要原因。其中一个重要原因是高糖可能通过抑制自噬途径致腹膜纤维化的发生,因此,自噬途径可作为治疗腹膜纤维化的新靶点。姜黄素作为一种中药制剂,因其无毒、副作用小且多靶点、多途径、多环节的作用特点,在抗纤维化方面有广阔的临床应用前景。因此,我们探讨姜黄素通过调节自噬途径在高糖诱导人腹膜间皮细胞纤维化的保护作用,为腹膜透析相关性腹膜纤维化的防治提供新的思路。方法:1.人腹膜间皮细胞进行体外培养,给予哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)抑制剂雷帕霉素(Rapamycin,R)10nmol/l预刺激1h,然后在高糖环境中培养24小时。将腹膜间皮细胞分三组:正常对照组(L,25mmol/l)、高糖组(G,126mmol/l)、高糖组+雷帕霉素组(GR,G126mmol/l+R10nmol/l),Westernblot法检测纤维化指标E-cadherin、α-SMA及自噬指标LC3II/I、Beclin-1的表达。2.采用MTT法检测人腹膜间皮细胞的生存率,最终确定姜黄素(Curcumin,C)刺激浓度范围为0-10umol/L,将腹膜间皮细胞分组,分别给予姜黄素(1,5,10umol/l)预刺激1h,然后在高糖环境中培养24小时。共分五组:对照组(L,25mmol/l)、高糖组(G,126mmol/l)、高糖+姜黄素1umol/l(GC1,G126mmol/l+C1umol/l)、高糖+姜黄素5umol/l(GC5,G126mmol/l+C5 umol/l)、高糖+姜黄素10umol/l(GC10,G126mmol/l+C10 umol/l)。Westernblot法检测纤维化指标E-cadherin、α-SMA及自噬指标LC3II/I、Beclin-1的表达。结果:1.高糖可减弱自噬导致腹膜纤维化的发生Western blot结果显示,与对照组比,高糖组纤维化指标E-cadherin(P0.05)表达减少、α-SMA(P0.05)表达增加,伴随LC3II/I的比值(P0.05)及Beclin-1(P0.05)表达显著减少。与高糖组相比,雷帕霉素组的自噬指标LC3II/I、Beclin-1表达增加,伴随纤维化指标E-cadherin表达增加、α-SMA表达下降(均P0.05)。2.姜黄素以剂量依赖性逆转自噬减弱高糖导致的腹膜纤维化的发生Western blot结果显示,与高糖组相比,姜黄素组E-cadherin(P0.05)表达上调及α-SMA(P0.05)的表达下调,LC3II/I的比值(P0.05)及Beclin-1表达上调(P0.05)。结论:高糖可通过抑制自噬作用导致腹膜纤维化的发生;姜黄素上调自噬改善高糖诱导的腹膜纤维化,并在一定范围内(0-10ummol/l)具有浓度依赖性。
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5
【图文】：

自噬,雷帕霉素,腹膜间皮细胞,青岛大学

青岛大学硕士学位论文结果2.1 高糖可减弱自噬导致腹膜纤维化的发生与对照组 L 相比，高糖组腹膜纤维化指标 E-cadherin 表达减见图 1A、图 1B；同时，LC3II/I、Beclin-1 表达下降（均 P＜0.0雷帕霉素作为自噬诱导剂[21]，可使自噬相关基因如 LC3II/I、Bec素对高糖刺激的腹膜间皮细胞进行干预，上调自噬，与 G 组相比Beclin-1 表达增加，见图 1C、图 1D，伴随纤维化指标 E-cadhe表达下降（均 P＜0.05），图 1A、图 1B。这进一步说明上调自噬糖减弱自噬导致腹膜纤维化的发生。

姜黄素,细胞存活率,自噬

图 2.不同浓度姜黄素干预后细胞存活率比较2.3 姜黄素以剂量依赖性逆转自噬减弱高糖导致腹膜纤维与高糖组比较，姜黄素组纤维化指标 E-cadherin 上调、α-SM见图 3A、图 3B，并显著提高 LC3II/I、Beclin-1（均 P＜0.05），素可诱导自噬，可通过上调自噬减弱高糖诱导的腹膜纤维化的发同时，不同浓度的姜黄素组进行比较，作用于腹膜间皮细胞Beclin-1 表达上调，腹膜纤维化指标 E-cadherin 表达上调，α-SM因此，0-10umol/l 浓度范围内，随着姜黄素浓度的增加，上述作姜黄素在 0-10umol/l 范围内逆转自噬减弱高糖诱导的腹膜纤维化赖性。

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