茯苓多糖对人宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移、促凋亡的影响及其机制

发布时间：2020-08-05 21:29

【摘要】：目的探讨茯苓多糖(pachymaran,PAC)对人宫颈癌HeLa细胞体外增殖抑制、迁移、促凋亡的作用的影响及其促凋亡作用的相关机制。方法分别用10、20、30、40、50、60、80、100、120mg/ml的茯苓多糖处理HeLa细胞24h,MTT法检测细胞增殖情况并筛选出适宜的低、中、高浓度的茯苓多糖用于后续实验。以低、中、高浓度的茯苓多糖处理HeLa细胞24小时后,倒置相差显微镜观察细胞的形态学影响;Hoechst 33342染色观察细胞核的变化;平板克隆实验检测细胞克隆形成能力;细胞划痕实验检测细胞的迁移能力;AV/PI双染法流式细胞术检测细胞凋亡率;流式细胞术检测细胞周期;Western-blotting法检测凋亡相关蛋白(Cleaved Caspase 3,Cleaved Caspase 8,Cleaved Caspase 9,Bcl-2,Bax)、迁移相关蛋白(MMP-9,VEGFA)及ERK通路相关蛋白(P-ERK1/2,ERK1/2)表达的情况。同时设置不加药的对照组。结果与对照组相比,当茯苓多糖浓度大于30mg/ml,HeLa细胞存活率明显下降(P0.05),当药物浓度大于60mg/ml时,细胞活力下降接近50%的效应。为避免高浓度药物可能会直接杀死细胞,导致后续实验取材时所获细胞数引起偏差而造成实验较大误差,故取30、40、50mg/ml茯苓多糖作为低、中、高浓度进行后续实验。与对照组相比,中、高浓度茯苓多糖处理细胞后,能使细胞和细胞核发生显著的凋亡形态学变化,低浓度下形态学变化并不十分显著;低、中、高浓度茯苓多糖均能以剂量相关性降低细胞克隆形成能力、降低细胞迁移率(P0.05)、增加细胞凋亡率(P0.05)、使S期细胞减少并阻滞于G2/M期(P0.05)、Cleaved Caspase 3,Cleaved Caspase 8,Cleaved Caspase 9,Bax表达较对照组明显增多,Bcl-2,MMP-9,VEGFA,P-ERK1/2表达明显减少,并具有统计学意义(P0.05)。ERK1/2表达无明显变化。结论茯苓多糖能显著抑制HeLa细胞增殖、并诱导其凋亡,且呈剂量相关性。其促凋亡机制可能与通过下调P-ERK 1/2表达,抑制ERK信号通路有关。同时,茯苓多糖对减少HeLa细胞的迁移有一定的作用。
【学位授予单位】：锦州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5
【图文】：

表 1.茯苓多糖作用于 HeLa 细胞的增殖抑制率物浓度（mg/ml) 24h 36h 48h0 0.02±0.01 0.05±0.02 0.08±0.0110 4.37±1.01 5.15±0.45 7.65±1.0920 9.75±1.32* 10.25±1.23* 11.36±1.35*30 13.85±1.27** 14.81±1.68** 16.15±1.02**40 20.01±1.13** 22.03±1.46** 25.84±0.78**50 32.06±0.87** 35.36±1.33** 37.15±1.28**60 45.75±1.48** 48.67±0.26** 52.18±1.51**80 53.58±0.99** 57.55±1.21** 71.79±1.23**100 74.88±1.45** 77.25±1.97** 90.81±1.64**120 82.09±0.86** 88.49±1.36** 95.04±1.09**注：与对照组比较，统计学具有显著性差异*P＜0.05 **P＜0.01

图 2.不同浓度茯苓多糖对 HeLa 细胞形态的影响（×200 倍）三、茯苓多糖对 HeLa 细胞核形态的影响与对照组细胞相比，中、高浓度组可见明显的核膜皱缩成呈碎块状、新月形致密浓染，细胞核大小不均匀，形态不规则，轮廓不清，颜色明显发白，视野内见较多明亮发白的淡蓝色荧光凋亡小体，细胞密度明显减少，单个正常细胞核少见。低浓度组可见少量皱缩变形的细胞核，边界模糊不清。对照组细胞呈均匀的蓝色,核膜完整，细胞大小较匀称（见图 3）。图 3.不同浓度茯苓多糖对 HeLa 细胞核形态的影响（×200 倍）

图 2.不同浓度茯苓多糖对 HeLa 细胞形态的影响（×200 倍）三、茯苓多糖对 HeLa 细胞核形态的影响与对照组细胞相比，中、高浓度组可见明显的核膜皱缩成呈碎块状、新月形致密浓染，细胞核大小不均匀，形态不规则，轮廓不清，颜色明显发白，视野内见较多明亮发白的淡蓝色荧光凋亡小体，细胞密度明显减少，单个正常细胞核少见。低浓度组可见少量皱缩变形的细胞核，边界模糊不清。对照组细胞呈均匀的蓝色,核膜完整，细胞大小较匀称（见图 3）。

【参考文献】

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本文编号：2781899