抑制MD2或HSP90对受雷公藤红素调控的若干转录因子活性的影响

发布时间：2020-08-07 05:35

【摘要】：目的雷公藤红素是中药雷公藤的重要生物活性成分,发挥着多种药理作用,在临床上具有广阔的应用前景。明确雷公藤红素作用机制,是其临床转化的基础。目前已发现雷公藤红素作用具有多分子靶点特性,但其如何影响这些靶点存在两种观点:一是雷公藤红素作用于少数共同上游靶点,继而影响多个下游靶点;二是无共同上游靶点,雷公藤红素直接作用于所有靶点。本项目通过检验雷公藤红素影响4种转录因子是否存在共同上游靶点,探索上述观点一是否合理。项目中所涉及的4种转录因子分别为:NF-κB、HSF-1(及受其调控的HSP70)、Nrf2(及受其调控的HO-1)和HIF-1,因为这4种因子前人研究较多,且它们基本能解释雷公藤红素的各种药理作用。本项目所研究的上游靶分子为MD2和HSP90,因为已有研究证明雷公藤红素能结合这两种分子,且其他研究提示这两种分子可能调节前述4种转录因子。本研究旨在进一步揭示雷公藤红素发挥治疗作用的分子机制,为下一步研究提供基础。方法本课题用HepG2细胞作为研究模型,首先筛选雷公藤红素对该细胞的安全有效剂量;其次,研究雷公藤红素对HepG2细胞NF-κB、HSF-1(及所调控的HSP70)、Nrf2(及所调控的HO-1)和HIF-1的影响;再次,使用NF-κB抑制剂PDTC或直接下调MD2表达,检测其对上述4种转录因子的影响,并与雷公藤红素作用相比较;最后,进一步探索使用HSP90抑制剂17-AAG或直接干扰HSP90表达,观察对上述4种转录因子的影响。结果雷公藤红素对HepG2细胞的半抑制浓度(IC_(50))为3.32μM。雷公藤红素能抑制NF-κB磷酸化,并诱导HSF-1(HSP70)、HO-1和HIF-1表达,且存在时间剂量依赖效应。使用PDTC对NF-κB、HSF-1(HSP70)和HO-1的影响,与雷公藤红素相同,但HIF-1变化与使用雷公藤红素不同;下调MD2后,只有NF-κB变化与雷公藤红素作用一致,说明MD2不是其调控上述4种转录因子的共同上游靶点。而使用17-AAG对NF-κB和HSF-1(HSP70)的影响,与雷公藤红素相同;下调HSP90后,只有NF-κB变化与雷公藤红素作用一致,说明HSP90也不是其调控上述4种转录因子的共同上游靶点。此外,我们还发现抑制NF-κB和抑制HSP90可能存在正反馈关系,具体机制尚不清楚。结论本课题再次证实了雷公藤红素能调控NF-κB、HSF-1(及所调控的HSP70)、Nrf2(及所调控的HO-1)和HIF-1表达,但MD2和HSP90均不是雷公藤红素发挥这些作用的共同上游靶点。本项目支持雷公藤红素药理作用是通过多靶点、多通路实现的,但不支持存在一个共同上游靶点。因此,对雷公藤红素调控这4种转录因子靶点的机制应该分别研究。此外,雷公藤红素两个主要作用,即抑制NF-κB和抑制HSP90之间可能存在正反馈关系,具体机制需要进一步研究。
【学位授予单位】：宁夏医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5
【图文】：

雷公藤红素,安全有效,HepG2细胞,剂量

素对 HepG2 细胞的安全有效剂量。HepG2 细胞铺板后，经不同浓度小时，检测细胞存活率。统计数据采用均数±标准误形式，每组样本藤红素；与对照组相比，*表示 P<0.05，**表示 P<0.01。对 HepG2 细胞 4 种转录因子（或调控产物）的影响表明，雷公藤红素对不同细胞内相应转录因子的影响不尽相赖效应。他人研究发现，雷公藤红素能抑制细胞内 NF-κB 活该信号通路下游靶基因的调控表达；同时，雷公藤红素促0 表达和热休克反应；在氧化应激反应中，雷公藤红素活化而在调控 HIF-1 上，雷公藤红素对其影响尚不统一。因此，所研究的 HepG2 细胞中，雷公藤红素对这 4 种转录因子（。

雷公藤红素,HepG2细胞

图 2.1 雷公藤红素对 HepG2 细胞 NF-κB 的影响。HepG2 细胞铺板贴壁后，经不同浓度的雷公藤红素处理一定时间，Western Blot 检测相关蛋白表达量。图中上方为 Western Blot 检测结果，下方为相应条带密度直方图（条带密度已经过内参矫正）。统计数据采用均数±标准误形式，每组样本实验至少重复 3 次。Cel：雷公藤红素；与对照组相比，*表示 P < 0.05，**表示 P < 0.01。

雷公藤红素,HepG2细胞

.2 雷公藤红素对 HepG2 细胞 HSF-1 及 HSP70（受 HSF-1 调控）的影响。HepG2 细胞铺经不同浓度的雷公藤红素处理一定时间，Western Blot 检测相关蛋白表达量。A：HSF-1（p-HHSP70（受 HSF-1 调控），每组图中上方为 Western Blot 检测结果，下方为相应条带密度带密度已经过内参矫正）。统计数据采用均数±标准误形式，每组样本实验至少重复 3 次藤红素；与对照组相比，*表示 P < 0.05，**表示 P < 0.01。

【相似文献】