黄檗愈伤组织不同培养条件下有效成分含量及抗氧化活性

发布时间：2020-08-08 05:45

【摘要】：黄檗(Phellodendron amurense Rupr.)系芸香科黄檗属植物,是孑遗种,是中国传统中药材关黄柏的基源植物,还是珍贵的用材树种,全身是宝,集保护、药用、经济等价值于一身。一直以来都是研究的热点,由于大量采伐和破坏,野生黄檗资源急剧衰减,现已成国家二级保护树种。一直以来关于黄檗的研究很多,但对黄檗愈伤组织的开发利用鲜有报道,且研究诱导黄檗愈伤组织培养条件的影响和优化以及愈伤组织中生物碱积累和其提取物抗氧化活性的研究,目前尚未报道。本文以黄檗愈伤组织为基础,探究了诱导愈伤的最优培养条件、有效成分积累量及抗氧能力。为保护野生黄檗、解决小檗碱药源供应紧张问题以及其抗氧化功能开发利用提供一些参考。1、通过单因素试验和响应面试验进行分析与设计,研究了诱导黄檗愈伤组织的最优培养条件。针对试验数据的多元回归拟合之后所得回归模型。通过对其模型的各项数据图表分析,且为了方便进行试验,设置最优条件:蔗糖18g/L、含氮量1.ON、6-BA1.4mg/L,在此条件下重复3次试验,最终所得诱导率约为97%。2、利用超声波法和高效液相色谱法对五种不同诱导培养因素下产出的黄檗愈伤组织中生物碱进行提取和测定,探究不同因素对黄檗愈伤组织中的生物碱积累的影响。综合结果,试验发现总体黄檗愈伤组织中小檗碱积累量大于药根碱含量,且掌叶防己碱含量甚少,蔗糖和含氮量对有效成分积累量影响最大。其中光照条件下小檗碱和掌叶防己碱积累量最大,分别约为1.40%和0.18%,而含氮量为2N时,药根碱积累量最大,约为0.81%。在选取因素条件时,为了使愈伤中能够积累较多的次生代谢物时,还应综合考虑此条件下的愈伤组织的生长状态、遗传稳定性、再生能力等。3、使用分光光度计法,以最优条件诱导培养出的黄檗愈伤组织和黄檗树皮为材料,测定了其各自的体外抗氧化活性,包括:DPPH自由基清除能力、铁离子还原能力、ABTS自由基清除能力。通过研究,当溶液体积分数为100%时,黄檗愈伤组织与黄檗树皮的自由基清除率均为90%以上两者几乎相等,且还原能力均较强,具有一定程度的抗氧化能力。
【学位授予单位】：东北林业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285;S567.19
【图文】：

而在综合单因素试验结果的基础之上，选取适宜的诱导条件和范围，应用响应面逡逑的设计方法进行试验，按照所得到的最优的诱导条件培养出的黄檗愈伤组织（见逡逑图２－４Ｄ），其繁殖速度较快、生长旺盛，不易褐化，质地疏松，更适合下一阶段的逡逑增殖。逡逑（邋；逡逑ｆｔ逦－＃?逦！逡逑图２－４黄檗愈伤组织逡逑Ｆｉｇ．２－４邋Ｃａｌｌｕｓ邋ｏｆ邋Ｐ．ａｍｕｒｅｎｓｅ逡逑（Ａ：培养初始阶段Ｂ：有光条件Ｃ：无光条件Ｄ：最优条件）逡逑２．６本章小结逡逑本章对黄檗愈伤组织的诱导培养进行了大致两部分的试验和探讨，首先是对逡逑几种主要影响因子的单因素试验，包括２，４－Ｄ和６－ＢＡ激素组合以及其他非激素因逡逑素（蔗糖浓度、含氮量、外植体、光照强度），其次，根据单因素试验结果，不同逡逑因素中蔗糖浓度、含氮量和激素组合对黄檗愈伤组织诱导及其生长的影响较较明逡逑显，因此，选取这三大影响因素及其适当范围进行响应面优化试验，寻找最佳的逡逑诱导培养条件。通过研究，发现如下：逡逑Ｋ激素组合为２，４－Ｄ２．０ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ１．０ｍｇ／Ｌ；蔗糖浓度为２０ｇ／Ｌ；含氮量为Ｎ；逡逑外植体为茎段；光照５５＾１0１0１邋ｍＡ＇上述条件对黄檗的愈伤组织诱导效果最好，逡逑－２２－逡逑

３）标准溶液的配制逡逑确称量小檗碱、药根碱、掌叶防己碱标准品分别约为５毫克、１．３毫克、４将上述流动相溶液各自制成ｌ0ｍｌ作为它们各自的母液。分别吸取５ｍｌ三合并成１５ｍｌ，摇匀，得到标准溶液。逡逑４）标准曲线的绘制逡逑确吸量小檗碱、药根碱、掌叶防己碱母液，依次吸０．５ｍｌ、ｌｍｌ、２ｍｌ、３ｍ于５ｍｌ容量瓶混成标准溶液，将流动相溶液用作溶剂以制备恒定体积、摇至不同浓度的标准溶液。根据上述色谱条件，分析不同浓度的标准溶液测量每个样品三次，并取出峰面积的平均值。作为回归计算，使用质量ｇ／ｍｌ）小檗碱Ｘｌ、药根碱ｘ２、掌叶防己碱ｘ３作为横坐标，峰面积值ｙ作，小檗碱ｙｉ、药根碱ｙ２、掌叶防己碱ｙ３的回归方程和相关系数，见图３－种标准曲线（图３－２、图３－３、图３－４）。逡逑ｉ＝邋１９６１．６ｘ１邋－邋１９８．９８邋Ｒ２邋＝邋０．９９８７逡逑２邋＝邋６５５．３２ｘ２邋－邋７８．０９７邋Ｒ２邋＝邋０．９９８９逡逑邋＝邋２０２８ｘ３邋－邋１９６．２２邋Ｒ２邋＝邋０．９９８８逡逑ｍＡＵ逦ｇ逡逑

药根碱浓度（ｍｇ／ｍｌ）逡逑Ｔｈｅ邋ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｊａｔｒｏｒｒｈｉｚｉｎｅ（ｍｇ／ｍｌ）逡逑图３－３药根碱标准曲线逡逑Ｆｉｇ．３－３邋Ｔｈｅ邋ｓｔａｎｄａｒｄ邋ｃｕｒｖｅ邋ｏｆ邋ｊａｔｒｏｒｒｈｉｚｉｎｅ逡逑－２６－逡逑

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