黄草乌炮制前后生物碱含量变化及亚急性毒性研究

发布时间：2020-08-10 06:58

【摘要】：乌头、川乌、草乌等乌头属植物是我国临床常用的毒性中药,是药用毒性中药的典型代表,也是我国历史上最早有记载的毒性中药材,其主要毒性成分为乌头类生物碱,毒性作用的主要靶器官为心脏与神经系统。大量研究表明,乌头属植物中所含生物碱既是毒性成份,也是其药用活性成份,具强心、镇痛、抗炎和降低血管通透性等作用,因此乌头属植物被广泛地用于临床治疗。由于乌头类生物碱毒性剧烈,而且其有效治疗剂量与中毒剂量或致死量极为接近,因此如有炮制不当或用药稍有不慎,即可引起中毒甚至死亡。黄草乌为毛莨科乌头属植物黄草乌(Aconitum vilmorinianum Komarov)的干燥块根。性热,味辛麻,有大毒,有祛风胜湿、消肿止痛等功效,临床主要用于治疗风寒湿痹、中风瘫痪、跌打损伤等,目前已收入2005年版《云南省药品标准》,是云南红药、肿痛消气雾剂等伤科药物处方中的重要组成部分。乌头属植物的主要有效成分和毒性成分均为乌头类生物碱,但与药典所记载的大部分乌头属植物所含主要生物碱不同,黄草乌生品中所含主要生物碱为滇乌碱,炮制品中主要生物碱为8-去乙酰滇乌碱,无法采用药典中草乌的质量标准对其毒性进行评价,目前国内外对黄草乌的研究主要集中在对其化学成分进行研究,对其毒性研究也只是停留在急性毒性研究阶段,更为深入的亚急性毒性研究和长期毒性研究尚未见相关报道。本课题研究的主要目的有(1)考察黄草乌炮制前后滇乌碱与8-去乙酰滇乌碱的含量变化(2)探讨黄草乌的毒性靶器官和药物量毒关系(3)通过比较黄草乌炮制前后化学成分变化,毒性靶器官的损害程度以及血压的变化,探讨黄草乌的炮制减毒作用。主要研究内容如下:1采用超高效液相色谱法测定黄草乌炮制前后滇乌碱、8-去乙酰滇乌碱的含量;2采用Bliss法测定黄草乌生品的大鼠半数致死量(LD_(50))以及黄草乌炮制品的大鼠最大给药量;3连续灌胃给药14天,观察麻醉大鼠Ⅱ导联心电图变化;检测血清中谷丙转氨酶(ALT),谷草转氨酶(AST),血尿素氮(BUN),肌酐(CR),肌酸激酶(CK),乳酸脱氢酶(LDH)的水平变化;观察心脏,肝脏和肾脏的脏器指数变化及病理组织形态学变化;观察大鼠血压收缩压、舒张压和平均脉压的变化。主要的研究结果如下:1黄草乌生品中滇乌碱的含量为263.96μg/g,未检出8-去乙酰滇乌碱,炮制品中未检出滇乌碱,8-去乙酰滇乌碱的含量为568.47μg/g;2黄草乌生品LD_(50)为4.2 g生药/kg,炮制品毒性较低,无LD_(50),测得最大给药量为24.0 g生药/kg;3连续灌胃给药14天后,连续观察60 min,黄草乌生品组的麻醉大鼠先后出现室性早搏、室性二联律和室颤等心律失常症状,炮制品组前期出现心动过缓,60 min后恢复正常;与空白组相比,黄草乌生品三个剂量组P波幅度和R波幅度均显著升高(P0.05),T波幅度均显著降低(P0.05),Q波幅度、S波幅度、ST振幅和ST段时间均无显著性差异(P0.05),低剂量组的心率、QRS时间,、PR间期和QTc间期均无显著性差异(P0.05);中剂量组和高剂量组心率明显降低(P0.05),高剂量组的PR间期和QRS时间明显延长(P0.05),中剂量组QRS时间只在30 min和45 min时显著延长(P0.05),高剂量组的QTc间期明显降低(P0.05),中剂量组的QTc间期只在30 min和45 min时显著降低(P0.05),同组大鼠不同时间段的心电图各项指标均无显著性差异(P0.05)。与空白组比较,黄草乌炮制品组各项血清生化指标均无显著性差异,生品低剂量组只有ALT和AST水平显著升高(P0.05),中剂量组ALT,AST,CR,CK,LDH水平均显著升高(P0.05),高剂量组ALT,AST,CR,BUN,CK,LDH水平均显著升高(P0.05)。与空白组相比,各组大鼠的心脏,肾脏,肝脏变化如下:(1)生品组心肌纤维间隙均明显扩大,炎性细胞浸润情况明显,炮制品组心肌纤维排列较整齐,间质中可见有少量炎性细胞浸润。(2)黄草乌生品低剂量组肾脏形态正常,炮制品组肾小球与肾小管结构清晰,肾小管上皮细胞无变性坏死,肾小球囊间无粘连狭窄,间质有少量炎性细胞浸润,生品中剂量组和高剂量组肾近曲小管上皮细胞水肿,界限不清且内有出血,间质炎性细胞浸润明显。(3)炮制品组肝索上细胞排列整齐,有少量炎性细胞浸润,生品组低剂量肝索上细胞排列紊乱,中剂量组肝细胞肿胀,细胞核大深染,肝索上细胞排列紊乱,高剂量组肝脏出现脂肪性病变,中央静脉有充血现象,肝血窦充血,炎性细胞浸润较为明显,肝索上细胞排列紊乱,细胞核大深染且可见双核。结论黄草乌生品对心脏、肝脏和肾脏均有损害,其中对心脏和肝脏的损伤较为严重,脏器损害程度与药物剂量呈正相关,经过炮制,毒性成分含量有所降低,毒性靶器官受损程度也有所降低,说明炮制对黄草乌具有减毒作用。
【学位授予单位】：广东药科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R283;R285
【图文】：

点心,电图,空白,间期

表 3.12 生品组高剂量组不同时间点心电图数据（ ± s，n=10）Table 3.12 ECG data of high dose group of raw products at different time points（ ± s，n=10）时间心率（次·min-1）T 波幅度（mv）QRS 时间（ms）QTc 间期（ms）PR 间期（ms）15min 274.33±15.82 0.116±0.034 17.698±3.318 141.06±10.20 54.955±8.37930 min 268.90±43.48 0.098±0.017 20.010±1.934 142.94±2.54 59.269±6.46145 min 261.00±21.25 0.094±0.027 21.875±2.589 145.58±9.71 58.321±8.17560 min 256.54±37.84 0.089±0.022 20.775±3.424 140.28±2.95 49.176±6.018

心电图,心电图,炮制品,点心

注：A 为 15 min 时心电图，B 为 30 min 时心电图，C 组为 45 min 时心电图，D 组为 60 min时心电图（下同）Note：A ：15 min B：30 min C：45 min D：60 min, same as below

生品,点心,电图

图 3.4 生品中剂量组不同时间点心电图Fig.3.4 ECG of medium dose group of raw products at different time points

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