基于表观遗传研究蜘蛛香有效部位抗缺氧的神经保护作用

发布时间：2020-08-10 09:41

【摘要】：目的:构建缺氧实验动物模型,并以此模型验证蜘蛛香有效部位对抗缺氧的疗效,同时动态观察实验动物行为学和组织形态学改变,并考察其表观遗传改变,以期探索表观遗传与缺氧及蜘蛛香有效部位疗效相关性。方法:1.缺氧动物模型的构建20只SD雌性发情期大鼠,按照2:1的比例随机与4月龄性成熟SD雄鼠同笼交配,24小时后,分别对每只雌性大鼠进行阴道涂片检测,确定已经交配成功,将孕鼠随机分成4组:空白组、模型组、蜘蛛香治疗组、红景天组;当日计为孕1天,此后进行缺氧处理,即将蜘蛛香组、红景天组、模型组孕鼠每日定时放入三气孵箱6小时,设置孵箱氧气浓度在8%,二氧化碳浓度4%,其余为氮气,期间不间断观察大鼠生命体征;空白组放置于同样湿度和温度的环境中,期间不间断观察大鼠生命体征;造模持续7天,造模期间,每日观察大鼠精神状态、体重、食量、大便性状、睡眠情况等一般情况。2.蜘蛛香治疗缺氧的行为学观察与组织病理学评价20只SD大鼠随机分为4组,空白组、模型组、红景天组及蜘蛛香治疗组。除空白组外各组按上述方法进行缺氧模型复制,模型复制成功后,红景天组灌胃诺迪康胶囊CMC-Na溶液,蜘蛛香组灌胃蜘蛛香环烯醚萜CMC-Na溶液,空白组与模型组灌胃CMC-Na溶液,各组灌胃连续7天。治疗期间每日观察大鼠体重、食量、大便性状、活动度、睡眠等一般情况,进行疾病指数评价;治疗结束等待至孕鼠生产,期间每日观察孕鼠体重、食量、大便性状、睡眠情况等一般情况;观察子一代大鼠大脑出生后大体情况,分别对7日龄和30日龄子一代大鼠进行大脑组织大体损伤指数,大脑组织病理切片HE染色观察分级评分;对30日龄子一代大鼠进行Morris水迷宫实验,测定鼠的定位航行和空间搜索能力,以推断子一代鼠的学习记忆能力,检测空间学习记忆功能。3.Me DIP-seq(Methylated DNA Immunoprecipitation Sequencing甲基化DNA免疫共沉淀测序)法差异甲基化分析动物分组,模型复制及治疗同上。分别取子一代30天大鼠大脑组织,提取大脑总DNA进行Me DIP-seq法差异甲基化分析,在全基因组水平上进行高精度的Cp G密集的高甲基化区域研究,快速有效地寻找基因组上的甲基化区域,从而比较不同样本间的DNA甲基化修饰模式的差异。结果:造模中,模型组、蜘蛛香组、红景天组大鼠出现精神萎靡,嗜睡懒动,仰面呼吸,呼吸急促,饮食体重明显下降,活动耐力降低,体毛枯槁杂乱,大便减少等符合大鼠低张缺氧的表现;空白组无上述异常表现。蜘蛛香治疗组实验大鼠食量增加,与空白组大鼠相比无显著差异(P0.05),体重在实验结束前尚未达到空白组大鼠体重,但较模型组增加显著(P0.05),大鼠反应较灵敏,活动度增加,Morris水迷宫实验结果与空白组无显著差异,但与模型组有显著差异;病理切片HE染色镜下观察大脑海马细胞损伤不明显,与模型组相比差异显著(P0.05)。与红景天组比较,蜘蛛香治疗组实验大鼠一般状态情况明显好转,体重食量差异无统计学意义(P0.05),Morris水迷宫实验结果二者无明显差异,病理切片HE染色镜下观察无明显差异。Me DIP-seq法差异甲基化分析我们发现缺氧环境可以引起机体发生甲基化修饰,且蜘蛛香环烯醚萜治疗后具有与疾病模型和红景天苷治疗组不同的甲基化修饰。蜘蛛香环烯醚萜对缺氧的干预机制可能和红景天不同。结论:实验选择造模方法合理,成功复制出符合缺氧病变特征的模型。蜘蛛香环烯醚萜治疗效果肯定,与红景天苷相似,也能显著改善缺氧模型大鼠恢复精神和体质状态,缺氧可以引起机体发生甲基化修饰的改变,蜘蛛香环烯醚萜治疗后的缺氧大鼠与红景天苷治疗组及疾病模型组发生的甲基化修饰在基因和信号通路上的改变不同。
【学位授予单位】：成都中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5
【图文】：

图 1-1 SD 大鼠精子涂片（X400）图 1-2 SD 大鼠精子涂片（X100）般情况及体征白对照组大鼠食欲良好，进食饮水正常，体重增加明显，全身活动度良好，反应灵敏。

各组体重

各组食量

【参考文献】

相关期刊论文 前6条

1 姚响芸;王萌;薛丽香;;Polycomb蛋白复合体对细胞衰老的表观遗传学调控[J];中国生物化学与分子生物学报;2012年04期

2 闫兴丽;洪缨;石晋丽;秦谊;张建军;林清;陈振振;赵仁;崔小丽;高学敏;;蜘蛛香环烯醚萜对肠易激综合征模型大鼠5-HT和5-HIAA的影响[J];中国中药杂志;2011年09期

3 周慧敏;李艳娜;;276例胎儿宫内窘迫相关因素分析[J];中国社区医师(医学专业);2010年29期

4 陈刚;胡燕荣;钟杰;刘伟;李江;温林豹;李建新;杨小朋;朱沂;孙振柱;;孕鼠腹腔注射脂多糖合并缺氧环境造成宫内胎鼠脑部损伤[J];中国康复理论与实践;2009年09期

5 闫智勇;张天娥;彭佳;张占平;秦晋之;陈畅;;蜘蛛香对焦虑模型大鼠行为学及脑组织神经递质含量的影响[J];中药药理与临床;2008年03期

6 薄涛,严超英,霍淑芳,李巍;结扎孕鼠双侧子宫动脉复制围产期缺氧缺血性脑损伤动物模型[J];中风与神经疾病杂志;2001年01期

相关硕士学位论文 前1条

1 张占平;蜘蛛香提取物体外抗结肠癌作用研究[D];西南交通大学;2010年

本文编号：2787912