元胡止痛方及其配伍镇痛药效评价及分子机制研究

发布时间：2020-08-10 20:31

【摘要】：背景疼痛是目前临床中最为常见的症状之一,令患者的身心受到极大的创伤,影响患者的正常生活。神经病理性疼痛(Neuropathic Pain,NP)及炎性疼痛(Inflammatory Pain,IP)更是疼痛中极具代表性的疼痛类型。本课题组前期研究已发现元胡止痛方可能的药效物质基础,明确了元胡止痛方治疗疼痛的药效,并通过药代动力学发现元胡、白芷可能的配伍机制为增加血药浓度。但元胡、白芷配伍镇痛的具体分子机制尚不明晰。基于以上思考,本研究从元胡、白芷配伍治疗神经病理性疼痛及炎性痛的药效评价、分子机制这两方面出发进行探究,为元胡止痛方临床应用提供理论及实验依据。研究内容本研究从元胡止痛方及其组方单药元胡、白芷配伍镇痛药效评价和分子机制这两部分展开。第一部分,元胡止痛方及单味药元胡、白芷对疼痛模型行为学研究本部分使用坐骨神经慢性压迫性损伤模型(Chronic constriction injury,CCI)及完全弗氏佐剂诱导的炎性疼痛模型(Complete Freund's adjuvant,CFA)进行药效学评价。并且根据两种疼痛的特点,设置给药时间,观察复方及拆方后单味药对这两种模型的机械痛阈值及热痛阈值影响。CCI组分别给予醋元胡提取物(YH)、白芷提取物(BZ)及元胡止痛方(YZP),造模后第6天开始给药,连续给药5天。考察大鼠CCI造模前1天,造模后1、3、5、7、9天患侧的热痛阈值(Thermal withdrawal latency,TWL)和机械痛阈值(Mechanical withdrawal threshold,MWT)变化。CFA模型组给药设置与CCI组一致,造模后30min后给药,连续给药9天。考察大鼠CFA造模前1天,造模后1、3、5、7天患侧的热痛阈值(TWL)和机械痛阈值(MWT)变化。第二部分,元胡止痛方及单味药元胡、白芷治疗疼痛分子机制探索本部分根据前期实验及文献调研结果,CCI模型选取术后第10天(给药第5天)的患侧脊髓组织;CFA模型选取术后第8天(给药第9天)的患侧脊髓组织进对mRNA进行RNA-seq二代测序。分别筛选两种模型给药后回调的差异基因,并对此部分差异mRNA进行GO功能富集分析。探索元胡、白芷协同镇痛可能起到作用的候选mRNA及其参与的生物过程。并通过对元胡止痛方中14种入血成分进行反向找靶,探究其可能的直接作用位点及参与的通路。研究结果第一部分,元胡止痛方及单味药元胡、白芷对疼痛模型行为学研究CCI模型造模后,除Sham组外均出现患侧足蜷缩或外翻等异样形态,MWT及TWL造模后呈现下降趋势,明显低于术前,与Sham组相比具有显著性差异至少满足P0.05,术后第7天(给药第2天)YZP组及YH组MWT及TWL与CCI组相比具有显著性差异至少满足P0.05。BZ组给药后,MWT及TWL无明显差异。但YZP组整体痛阈值与YH组相比处在略高的水平。CFA造模后,除Sham组均出现患侧足肿胀等异样形态,MWT及TWL造模后呈现下降趋势,CFA模型组与Sham组相比具有显著性差异至少满足P0.05,给药组中YZP组及YH组的MWT及TWL与CFA模型组相比具有统计学差异至少满足P0.05,BZ组的MWT及TWL实验全程与CFA模型组相近。但YZP组整体痛阈值与YH组相比处在略高的水平。第二部分,元胡止痛方及单味药元胡、白芷治疗疼痛分子机制探索元胡止痛方及单味药元胡、白芷对CCI模型共同回调mRNA共12个,分别为 Bst2、Car4、Ccdc69、Cdkn1c、Dpt、Fam64a、Mki67、Mst1r、Siglec1、Tagln、Tmem14c、Tom112,GO富集分析结果显示复方与单味药共同参与生物过程为炎症反应过程、机体防御过程、损伤响应过程以及金属离子传输,另有免疫调节相关和血管调节相关的生物过程。元胡止痛方及单味药元胡、白芷共同回调mRNA共11个,分别为Aatf、Alad、Ate1、Cntnap5c、Fam122b、LOC102723236、Myb12、Myg1、Pknox1、Tmem14c、Tmod2,GO富集分析结果显示复方与单味药共同参与生物过程大多集中在蛋白水解、代谢、血管调节等相关过程。元胡、白芷协同作用疼痛可能是通过直接作用cAMP、PI3K-Akt、MAPK这三条信号通路上的部分靶点实现的,元胡可能作用于GCPR、JNK及p38,白芷可作用于BRAF,二者又可能共同作用于PI3K、PDE4、RTK。给药元胡止痛方后,CCI 回调 mRNA 中 T1r8、Dcn、Comp、Bmmp6、Igf2、I11rn 等;CFA 回调 mRNA中Wnt16、Wnt5b、Hif1an、Itgb4,Co12a1、Thbs3等均与这三条通路有着直接或间接的关系。结论本研究证明元胡止痛方及其组成元胡可改善CCI模型及CFA模型诱导的机械痛敏及热痛敏。拆方剂量下白芷对这两种模型无镇痛作用。复方效果在一定程度上优于单味药。元胡止痛方中单味药组成元胡、白芷协同干预神经病理性疼痛可能是通过作用于脊髓组织的 Bst2、Car4、Ccdc69、Cdkn1c、Dpt、Fam64a、Mki67、Mst1r、Siglec1、Tagln、Tmem14c、Tom112及干预炎症反应、机体防御、损伤响应、金属离子传输以及免疫调节相关和血管调节相关的生物过程。干预炎性疼痛能是通过作用于脊髓组织的 Aatf、A1ad、Ate1、Cntnap5c、Fam122b、LOC102723236、Myb12、Myg1、Pknox1、Tmem14c、Tmod2及干预蛋白水解、代谢、血管调节等相关过程。元胡止痛方中元胡生物碱类成分可能直接作用于GCPR、JNK及p38,白芷香豆素类成分可能直接作用于BRAF,二者又可能共同作用于PI3K、PDE4、RTK。从而通过cAMP、PI3K-Akt、MAPK通路达到协同镇痛的效果。
【学位授予单位】：中国中医科学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5
【图文】：

图１－１邋ＣＣＩ造模后３天ＳＤ大鼠足部形态图逡逑３．２机械痛阈的变化逡逑

图１－２元胡止痛方及单味药元胡、白芷对大鼠ＣＣＩ模型机械痛的影响逡逑

图１－３元胡止痛方及单味药元胡、白芷对大鼠ＣＣＩ模型热痛痛阈的影响逡逑

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本文编号：2788575