红花注射液生产过程羟基红花黄色素A迁移转化及活性研究

发布时间：2020-08-11 14:49

【摘要】：红花注射液是由菊科植物红花经水提醇沉工艺加工而成,具有活血化瘀,抗氧化,抗炎,降低血压和血脂等药理作用,临床多用于预防和治疗冠心病、闭塞性心脑血管等疾病,且效果显著。目前对红花注射液的药理研究和临床研究较多,关于红花注射液的活性成分研究鲜有报道,尤其是对于活性成分的溯源更是少见。参考质量标志物的基本要求,本文对红花注射液的主要活性成分羟基红花黄色素A(HSYA)在生产过程中的迁移转化规律进行了深入研究,以体外抑制血小板聚集、抗凝血等生物活性为指标,探究了随着活性成分HSYA的迁移转化,红花注射液生物活性的变化趋势。本文研究内容如下:1.为了探讨红花注射液各生产工艺关键环节对红花注射液品质的影响,本章节以延长活化部分凝血活酶时间(APTT)和体外抑制二磷酸腺苷(ADP)诱导的血小板聚集率为指标,评价了红花注射液生产过程中的提取、浓缩、两次醇沉、水沉、两次灭菌等关键环节中间体的活性,并运用液相色谱分析技术测定了主要化学成分的含量变化。结果表明,随着红花注射液的生产工艺的进行,各中间体的体外抑制血小板聚集率逐渐降低,延长APTT活性变化趋势为先降低然后又升高。此外,羟基红花黄色素A(HSYA)的含量逐渐降低,对羟基肉桂酸的含量升高,并且产生了新的化学成分对羟基苯甲醛。另外,研究结果还表明:在红花注射液生产制备关键环节中,灭菌环节对红花注射液活性和HSYA的含量影响较大。2.依据红花注射液生产过程的关键环节条件(温度、时间、pH),对HSYA进行了高温加热,调碱、灭菌等处理,测定了HSYA的稳定性以及含量变化,并对降解产物进行了初步分析。结果表明HSYA在100℃加热1h后,含量降低了18%;调节pH至8.0后再115℃湿热灭菌40min两次,含量降低至23%。经色谱图分析HSYA降解产生了新的化学成分;经与标准品对比分析,降解产物有对羟基苯甲醛和对羟基肉桂酸。以上研究结果说明,羟基红花黄色素A具有对热、碱的不稳定性,且红花注射液中的活性成分对羟基苯甲醛、对羟基肉桂酸的一部分由HSYA降解转化而来。3.以APTT、PT、TT和ADP诱导的血小板聚集等四项生物活性为指标,对比分析了HSYA经高温、调碱、灭菌等处理前后生物活性的变化。结果表明:HSYA不具有延长APTT活性,HSYA降解样品随着体系浓度的增加,表现出显著延长APTT活性,且呈现量效正相关;HSYA以及HSYA降解样品随着体系浓度的增大,延长PT、TT的活性增强;HSYA以及HSYA降解样品都具有较强的抑制血小板聚集的作用,都呈现量效正相关。研究结果还说明,HSYA经降解后APTT、PT、TT活性增强,抑制血小板聚集活性减弱。
【学位授予单位】：山西大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：O657.72;R285
【图文】：

第一章 绪论1.5 本课题研究内容、技术流程和主要创新点1.5.1 研究内容基于以上的研究背景以及意义，本论文主要研究以下工作内容：(1)测定红花注射液工艺规程中 HSYA 的含量变化以及红花注射液中间体整体物活性的变化规律；(2)探究红花注射液生产过程的关键环节对 HSYA 稳定性的影响；(3)HSYA 转化产物的分析鉴定和生物活性的测定。1.5.2 研究思路与技术流程图

11图 2.1 中间体的 HSYA、对羟基苯甲醛、对羟基肉桂酸含量测定色谱图Fig.2.1 HPLC chromatograms of HSYA, p-hydroxybenzaldehyde and phydroxycinnamic acid inintermediatesnotes: ①HSYA; ②p-hydroxybenzaldehyde ; ③hydroxy cinnamic acid.按”2.2.2.1”色谱分析条件测得中间体 2-7HPLC 如图 2.1 所示，中间体的主要测定物质 HSYA、对羟基苯甲醛、对羟基肉桂酸与其他组分基本达到基线分离，此色谱条件可用于各中间体的含量测定。

图 3.1 HSYA 经过加热、灭菌的液相图Fig 3.1 HPLC of HSYAafter heating and sterilization注：A 是 HSYA 标准品溶液；B 是 HSYA 在 100 加热 1h；C 是 HSYA 在 B 的基础上 pH8.0、115℃40min 灭菌一次；D 是 HSYA 在 C 的基础上 pH8.0、115℃、40min 灭菌两次；E 是标准对照品。A-D 供试品采用“2.2.3”色谱分析条件对热、碱稳定性研究中的降解产物进行了分析，并将液相色谱和数据与标准品进行了比较。如图 3.1 所示，①号是HSYA 为主要化合物，在经过高温、调碱、灭菌处理之后，HSYA 可转化为②③号峰。根据本课题组前期研究推测，②③号推测为对羟基苯甲醛、对羟基肉桂酸[103]。进一步利用标准品比对分析，如图，确认②①③号峰分别为为对羟基苯甲醛、HSYA、对羟基肉桂酸。三个化合物的结构式分别如图 3.2 所示。

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本文编号：2789209