丹参中农药残留、黄曲霉毒素含量测定及其抗菌活性评价研究

发布时间：2020-08-13 00:46

【摘要】：目的本研究以非GAP基地自种的大宗中药材丹参为研究对象,分别建立气相色谱及液质联用技术测定药材中农药及黄曲霉毒素的残留水平,并采用微量热法考察药材的抗菌作用,结合化学计量学技术评价多批次丹参药材的抗菌作用差异,通过建立药材化学指纹图谱及抗菌作用的“谱-效”关系,探寻其主要的抗菌活性成分,以期为丹参药材的安全性及抗菌作用评价提供参考和依据。方法本文主要从下几个方面开展研究:1、采用并优化2015版《中国药典》附录中农药残留检测法色谱法测定丹参中农药残留量。2、优化2015版《中国药典》黄曲霉毒素检测法结合免疫亲和柱净化与LC-MS/MS法测定丹参中黄曲霉毒素的污染水平。3、采用微量量热法比较丹参对金黄色葡萄球菌、耐药金黄色葡萄球菌、大肠杆菌及绿脓杆菌的活性作用。4、结合丹参水溶性成分的化学指纹图谱与其抗绿脓杆菌作用进行“谱效”关系研究,探明其主要的抗菌活性成分。结果1、在确证方法学验证(包括仪器精密度,样品回收率和稳定性)符合规定的前提下,测定32批不同产地的丹参药材中有机氯类、有机磷类及拟除虫菊酯类农药的残留量,结果显示共检测出7种有机磷类和拟除虫菊酯类农药残留,其中检测率最高的为氯氰菊酯,且在10批样品中被检出,残留量最高的农药为久效磷为,残留水平0.028mg/kg。以上结果经UFLC-MS/MS法验证,避免了假阳性结果。2、采用优化的免疫亲和柱法检测黄曲霉毒素的残留水平,结果发现,32批丹参样品中均未检出黄曲霉毒素,加入黄曲霉孢子共培养7天的霉变丹参样品中均检出AFB1与AFG1,但均未超过《中国药典》(2015版)限量规定。3、通过微量热法来评估不同产地的丹参样品对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和耐药性金黄色葡萄球菌的抗菌效果。结果显示,不同产地的丹参的抗菌活性差异较大,如5个产地中北京购买的丹参抗大肠杆菌最强而抗金黄色葡萄球菌最弱。4、结合聚类分析、主成分分析和多元线性回归分析,探讨丹参药材HPLC-DAD化学指纹图谱与其抗绿脓杆菌作用的“谱-效”关系。结果发现,北京采集的丹参样品对绿脓杆菌的抗菌作用最强,平均抑制率最高;相反,从四川采集的丹参样品对绿脓杆菌的抗菌作用最弱,平均抑制率最小。“谱-效”关系研究结果表明:指纹图谱中的峰4、峰8、峰13、峰17和峰18为主要的5个抗菌活性物质。结论本文通过测定丹参药材黄曲霉毒素、农药的污染水平及其对多种细菌的作用,并通过其化学指纹图谱与抑菌作用“谱-效”关系的建立阐明了其抗菌作用成分,系统评价了不同产地和来源丹参药材的安全性及抗菌作用差异,为其临床合理、安全应用提供了理论依据和数据支持。
【学位授予单位】：锦州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R284.1;R285

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