鹿皮胶熬制工艺优化及免疫调节机制研究

发布时间：2020-08-14 10:16

【摘要】：鹿皮胶是以鹿科动物梅花鹿(Cervus nipport T.)或马鹿(Cervus elaphus L.)的皮为原料熬制而成,具有补血益气、补肾壮阳等功能。目前主要存在的问题是鹿皮胶的原料难以鉴定、熬制工艺、药理作用以及质量标准研究工作还不完善。鉴于上述问题,本文利用DNA条形码技术,对不同鹿种的鹿皮进行鉴定区分,建立了新的鉴别方法;同时对鹿皮胶的熬制工艺进行了改进;并对鹿皮胶的免疫调节作用进行深入研究,具体的研究结果如下:1.鹿皮种类及真伪的DNA条形码鉴定基于样品的COI条形码序列,建立NJ树分析正品鹿皮与混伪品的区别。NJ树结果显示,正品梅花鹿鹿皮和马鹿鹿皮分别聚集为独立的一支,支持率为100%,有明显的单系性。混伪品样品也分别聚集为单独的一支,支持率为100%。本研究证明基于COI序列的DNA条形码技术可以有效鉴别鹿皮真伪。2.鹿皮胶的熬制工艺研究以出胶率、总蛋白含量和综合评分为主要考察指标,通过正交实验优选,通过直观分析及方差分析可知,煎煮次数(B因素)水平变化对实验结果有显著影响,结合实际生产需要,熬制条件调整为A_2B_3C_1,即:加10倍量水,煎煮5次,每次2小时,即为煎煮5次,每次加入10倍量水,每次2小时。3.验证鹿皮胶的免疫调节作用采用腹腔注射环磷酰胺(Cy)法建立小鼠免疫低下模型,研究鹿皮胶的免疫调节作用,结果显示鹿皮胶对免疫低下小鼠的脏器指数,脾淋巴细胞增殖都有促进作用,可以增强小鼠腹腔MΦ能量代谢水平和吞噬中性红的能力,提高外周血CD4~+、CD8~+细胞数,和CD4~+/CD8~+的比值,实验证明鹿皮胶具有一定的免疫调节作用。4.鹿皮胶质量标准建立参照2015版《中华人民共和国药典》阿胶项下检测指标,我们对自制10批鹿皮胶样品的水分、重金属、水不溶物及氨基酸含量进行了测定,综合10批样品检测结果,暂定鹿皮胶水分含量不超过15%;Pb的含量不超过1.36mg/kg,Cd的含量不超过0.1mg/kg,As的含量不超过0.1mg/kg,Hg的含量不超过0.1mg/kg,Cu的含量不超过0.83mg/kg;水不溶物含量不超过2%;氨基酸总含量不低于80%。
【学位授予单位】：吉林农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R283;R285
【图文】：

序列,PCR扩增,序列信息,牛皮

图 1.1 各样品 PCR 扩增结果Fig 1.1 The results of PCR amplification of each sample上而下第 1 条条带的序列长度；图中编号分别对应表 1 中实验材料编号。得 20 个样品的 COI 序列，其中鹿种样品的平均（C+G）+T 的含量明显高于（C+G）的含量，牛皮的（C+G）含。COI 序列信息请详见表 1-3。

序列,鹿皮,序列,支持率

序列作为外类群。鹿属、驯鹿属、炃鹿属、牛属各聚为一支与形态分类学一致。驯鹿 3样本序列和炃鹿（TL014、TL015、TL016、TL017、TL018）5 个样本的所有个体各形一个单系，节点支持率分别为 77.1%和 100%，驯鹿位于系统树鹿科基部，炃鹿位于其方。马鹿（ML007、ML008、ML009、ML010）共 4 个样本，其于数据库数列 GQ329009.1一支节点支持率为 98.8%。梅花鹿（MHL001、MHL002、MHL003、MHL004、MHL005、HL006）共 6 个样本，于 4 个数据库序列（EU835712.1、KM047663.1、GQ329015.1、385847.1）聚为一支节点支持率为 99.9%，新西兰赤鹿（CL011、CL012、CL013）聚一支。证明基于 COI 序列的 DNA 条形码技术可以有效鉴别鹿皮真伪。见图 1.2。

鹿皮,血常规,小鼠,空白

表 3-4 鹿皮胶对免疫低下小鼠血常规 WBC、RBC、PLT 等指数的影响Table 3-4 Effect of deer skin glue on blood routine WBC, RBC and PLT in immunocompromised mi组别剂量（mg/kg） WBC(103/mm3) RBC(108/mm3) PLT(103/mm3)空白组 Control 11.08±2.75 10.38±1.35 1167.8±125.48模型组 Cy 100mg/kg 9.02±2.56#7.84±1.15##831.4±86.97###阳性组 CCA 3g/kg 15.2±2.94** 10.7±1.62** 1177.75±134.96**低剂量 DG 1.5mg/kg 12.22±2.88* 8.71±1.83* 916.2±72.1*中剂量 DG 3mg/kg 15.44±3.58*** 10.18±1.16** 1038.8±98.09**高剂量 DG 6mg/kg 13.02±2.39* 9.2±1.33* 958.6±104.52*注：所有数据均表示为为 x ±S(n=8)，与空白组相比：#P<0.05，##P<0.01；与模型组相比：*P<0.05，**P<0.All data were expressed as x ±S (n=8). Compared with control group:#P<0.05,##P<0.01; Compared with Cy<0.05, **P<0.01.

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